梨樹(shù)主要病害的分子檢測(cè)及其生物化學(xué)協(xié)同控制研究.pdf

1、梨黑斑病、梨輪紋病和梨炭疽病是梨樹(shù)三大主要病害，主要為害果實(shí)，葉片，也能侵染枝條。三種病害在我國(guó)普遍發(fā)生，均曾經(jīng)大范圍流行，造成重大損失。
　　 本文以三種病害為研究對(duì)象，建立了一套梨輪紋病和炭疽病的分子檢測(cè)體系;測(cè)定了市場(chǎng)上常見(jiàn)化學(xué)藥劑對(duì)三種病害病原菌的室內(nèi)毒力指數(shù);開(kāi)展微生物-化學(xué)復(fù)配藥劑田間防治三種病害的試驗(yàn);熒光定量PCR監(jiān)測(cè)生防菌處理后對(duì)梨葉片抗氧化相關(guān)基因的表達(dá)豐度，以探明生防機(jī)理，為三種病害有效控制提供理論和實(shí)踐依

2、據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　 采集病樣，分離純化后獲得梨炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)和輪紋病菌(Botryosphaeria berengeriana)菌株各20株，提取菌株基因組DNA。根據(jù)Genebank上炭疽屬和輪紋屬不同小種的ITS序列差異設(shè)計(jì)兩對(duì)引物TJ1/TJ2和LW1/LW2。由此建立的PCR體系可分別從炭疽菌菌株和輪紋菌菌株中擴(kuò)增出317bp和325bp的特異性條帶，對(duì)

3、其他相似或相近的病原真菌則無(wú)擴(kuò)增條帶，表明設(shè)計(jì)的兩對(duì)引物具有較高的種屬?；?。本文還比較了常規(guī)PCR和巢式PCR技術(shù)的靈敏度。常規(guī)PCR技術(shù)檢測(cè)梨輪紋病菌基因組DNA的靈敏度為10pg，巢式PCR技術(shù)的靈敏度為100ag，巢式PCR技術(shù)的靈敏度比常規(guī)PCR提高了約105倍。將不同稀釋倍數(shù)(10個(gè)/ml、102個(gè)/ml、103·個(gè)/ml、104·個(gè)/ml、105·個(gè)/ml)的輪紋病菌孢子懸浮液噴施在梨果上，提取梨果實(shí)DNA進(jìn)行巢式PCR檢

4、測(cè)，均能成功地檢測(cè)出病原菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:利用巢式PCR技術(shù)，可以準(zhǔn)確、靈敏地監(jiān)測(cè)梨輪紋病菌在果園的種群消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)。
　　 選取市場(chǎng)常見(jiàn)的20種化學(xué)藥劑，對(duì)黑斑病菌A-1、梨輪紋病菌P-16、炭疽病菌I-1進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定。結(jié)果表明，25％丙環(huán)唑乳油能有效抑制梨黑斑病菌、輪紋病菌、炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)，EC50值分別為0.031μg/ml、0.019μg/ml、0.020μg/ml。此外，10％苯醚甲環(huán)唑可濕性粉劑、25％咪酰胺乳油、

5、40％氟硅唑乳油，30％己唑醇可濕性粉劑等四種藥劑對(duì)梨輪紋、黑斑、炭疽病菌均表現(xiàn)出較高毒力，對(duì)菌絲的生長(zhǎng)抑制作用較強(qiáng)，而50％烯酰嗎啉可濕性粉劑、25％甲霜靈可濕性粉劑、15％三唑酮可濕性粉劑等藥劑對(duì)菌絲的生長(zhǎng)抑制作用較弱。本文評(píng)估了常見(jiàn)20種化學(xué)藥劑對(duì)梨三大病害的抗藥性風(fēng)險(xiǎn)，為果園的合理施藥提供參考依據(jù)。
　　 目前生產(chǎn)上通常采用化學(xué)藥劑防治上述三大病害。這種化學(xué)防治果樹(shù)病害的方法不僅造成生態(tài)環(huán)境嚴(yán)重污染，而且直接增加了有毒化

6、學(xué)物質(zhì)在果品中的殘留量，對(duì)人類健康帶來(lái)危害。生物防治可以降低化學(xué)農(nóng)藥的使用量、降低梨果表面化學(xué)殺菌劑的殘留量、保護(hù)生態(tài)環(huán)境。本研究利用一株對(duì)黑斑病、輪紋病和炭疽病均具有良好防治效果的枯草芽孢桿菌sf-628和25％丙環(huán)唑乳油復(fù)配(2∶1)防治果樹(shù)病害。田間試驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)配劑、化學(xué)藥劑、sf-628對(duì)梨輪紋病的平均防治效果分別為86.2％、86.9％、64.9％;對(duì)梨炭疽病的平均防治效果分別為80.1％、78.8％、63.0％;對(duì)黑斑病

7、的平均防治效果為83.1％、85.8％、77.0％。結(jié)果表明，復(fù)配藥劑與常規(guī)使用的化學(xué)藥劑防效大致相同，但是只使用1/3的化學(xué)藥劑用量，實(shí)現(xiàn)生物農(nóng)藥部分替代化學(xué)藥劑的作用。
　　 本文采用熒光定量PCR分析了噴施生防菌sf-628茵液后對(duì)梨葉片苯丙氨酸解氨酶(PAL)和過(guò)氧化氫酶(CAT)基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明:生防菌液處理能誘導(dǎo)梨樹(shù)產(chǎn)生抗性，提高梨葉片內(nèi)部PAL和CAT基因表達(dá)水平。Real-time PCR分析結(jié)果表明:噴