2008年--外文翻譯--草莓果醬中由于真菌成長產(chǎn)生的揮發(fā)性化合物（譯文）

1、<p>　　5915漢字，3750單詞，19700英文字符</p><p>　　出處：Nieminen T, Neubauer P, Sivelä S, et al. Volatile compounds produced by fungi grown in strawberry jam[J]. LWT-Food Science and Technology, 2008, 41(10): 20

2、51-2056.</p><p>　　本科畢業(yè)設(shè)計(論文)</p><p><b>　　外文參考文獻譯文</b></p><p>　　學(xué) 院 輕工化工學(xué)院 </p><p>　　專 業(yè) 食品科學(xué)與工程 </p><p>　　2010 年 6月</p>

3、<p>　　草莓果醬中由于真菌成長產(chǎn)生的揮發(fā)性化合物</p><p>　　Nieminen T, Neubauer P, Sivelä S</p><p><b>　　摘 要</b></p><p>　　真菌是破壞果醬和其他水果蜜餞最嚴重的微生物。通過真菌產(chǎn)生的揮發(fā)性化合物質(zhì)可以用來檢測食品中真菌的生長。這項研究的目的是

4、確定在草莓果醬中真菌生長所產(chǎn)生的有機化合物。分離出10株果醬真菌，確定酸奶或室內(nèi)空氣中的草莓醬瓊脂增長而產(chǎn)生的揮發(fā)性化合物，使用氣相色譜和質(zhì)譜分析真菌產(chǎn)生的分離，鑒定及量化。最常見的制作揮發(fā)性代謝產(chǎn)物為2-戊酮（由10株產(chǎn)），3-甲基-1-丁醇（9株），1,3-戊二烯（8株），乙醇（8株）和苯乙烯（7株）。從17至5200納克分別占這些發(fā)霉的草莓果醬瓊脂克測量化合物已在2天孵化。結(jié)果表明，在這項研究確定出揮發(fā)性真菌代謝產(chǎn)物可以用來檢測真

5、菌污染和干擾。2007年瑞士社會食品科學(xué)與技術(shù)。由Elsevier出版有限公司保留所有權(quán)利。</p><p>　　關(guān)鍵詞：微生物揮發(fā)性有機化合物，果醬，真菌,草莓,檢測。 </p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　1 介紹................................................

6、.............1</p><p>　　2 材料與方法.......................................................2</p><p>　　2.1真菌和草莓果醬................................................2</p><p>　　2.2 孢子懸浮液的制備...

7、...........................................2</p><p>　　2.3 使用靜態(tài)頂空法進行揮發(fā)性化合物的采樣..........................2</p><p>　　2.4 使用揮發(fā)性有機物采樣吸附劑....................................3</p><p>　　3 結(jié)果

8、.............................................................5</p><p>　　3.1真菌揮發(fā)性有機化合物的靜態(tài)頂空分析中的應(yīng)用方法.................5</p><p>　　3.2 分析真菌揮發(fā)性有機物吸附劑的應(yīng)用..............................6</p><p

9、>　　4 討論.............................................................8</p><p>　　鳴謝..............................................................10</p><p><b>　　1介紹</b></p>&l

10、t;p>　　果醬通常使用在大規(guī)模的食品加工業(yè)例如風味更加甜的雪糕產(chǎn)品，酸奶和糕點。真菌是污染水果和漿果濃縮液與造成低水活度最嚴重的微生物。真菌孢子的原料是滅活烹調(diào)過程中的果醬，大果醬容器在食品工業(yè)中可重新由孢子污染室內(nèi)真菌，例如在容器中的真菌部分耗盡。真菌生長惡化，果醬和感官質(zhì)量可能引入過敏原和霉菌毒素干擾。</p><p>　　大部分的真菌檢測方法了提供食品要求的代表采樣和處理食物樣本真菌生長前或霉菌組件

11、可以被檢測到。一種真菌監(jiān)測非侵入性方法糧食的增長是揮發(fā)性有機化合物檢測（揮發(fā)性有機化合物）產(chǎn)生的真菌（e.g. Magan & Evans, 2000;Paolesse et al., 2006; Schnurer, Olsson, & Bo¨rjesson, 1999）。在這項研究中，我們的目標是確定和量化的揮發(fā)性（揮發(fā)性有機化合物）的室內(nèi)污染物產(chǎn)生的有機物真菌在草莓果醬增長，以尋找化合物這表明真菌的生長。&

12、lt;/p><p><b>　　2 材料與方法</b></p><p>　　2.1 真菌和草莓果醬</p><p>　　在這項研究中所使用的10株真菌中，有9個來自同一個食品加工廠受污染的隔離草莓果醬，酸奶或室內(nèi)空氣中。(表1).枝孢菌95/113是從一個兒童日托室內(nèi)空氣中心分離而得。中板用于隔離室內(nèi)空氣中的真菌菌株的增長是確定酵母提取葡萄糖氯霉素

13、瓊脂（YGC-瓊脂，Merck，Whitehouse Station，USA）。通過光鏡的基礎(chǔ)和掃描電子顯微鏡可以確定該真菌菌株的屬或種級別的菌落形態(tài)。在草莓醬工業(yè)生產(chǎn)中的水，草莓，蔗糖為30% w/w，果膠和淀粉。pH值為4.0，水活性（aw）0.91。制作的果醬，冷卻至60攝氏度，并分入無菌玻璃瓶存放在4攝氏度，直到使用。草莓果醬瓊脂準備如下：670克草莓果醬，瓊脂25克和1000毫升去離子水混合后用氫氧化鈉將pH值調(diào)整到4.8。媒

14、介消毒條件為116 攝氏度15分鐘。</p><p>　　表1 研究所用的真菌菌種</p><p>　　2.2 孢子懸浮液的制備</p><p>　　株真菌培養(yǎng)為5或12天的麥芽提取瓊脂（40克麥芽提取物，蛋白胨1克，20克葡萄糖，瓊脂15克，去離子水1000毫升，通過高壓滅菌消毒121攝氏度15分鐘）。孢子混合到無菌的0.1%蛋白胨水配發(fā)（3至10毫升）的板塊。該

15、孢子濃度估計顯微計數(shù)使用紐鮑爾改善細胞計數(shù)室（深度0.02毫米，Karl Hecht, Sondheim,德國）。孢子懸浮液稀釋用無菌0.1%蛋白胨水含有1 107 或1 105個孢子每毫升。</p><p>　　2.3 使用靜態(tài)頂空法進行揮發(fā)性化合物的采樣</p><p>　　草莓果醬10克瓊脂斜面的準備，1個22毫升頂空藥瓶和200毫升的孢子接種小瓶,每毫升含有1 105孢子。采樣前2

16、至6天接種小瓶必須蓋上特氟隆涂層硅和鋁隔壓接帽在黑暗環(huán)境中室溫培養(yǎng)。靜態(tài)頂空采樣的是同一個HS49加大碼自動頂空采樣（Perkin Elmer，Norwalk，美國）。該取樣器在采樣前在70攝氏度下加熱25分鐘。針被加熱到80攝氏度后轉(zhuǎn)換至85攝氏度,揮發(fā)性有機物被集中在一個冷槽中（30厘米的惠普-揮發(fā)性有機化合物19091R-316毛細管柱，Hewlett-Packard, Palo Alto,美國）用液氮冷卻在零下80攝氏度利用低溫

17、聚焦配件的0993-5406頂空取樣器。冷槽之間安裝轉(zhuǎn)換的頂空毛細管采樣和分析柱（惠普色譜柱，30米，內(nèi)直徑0.32毫米，薄膜厚度0.25毫米）。下面的氣相色譜（惠普6890）方案適用：35攝氏度3分鐘，加熱速度為40至70攝氏度每分鐘，20至120攝氏度每分鐘，50至220攝氏度每分鐘。確定該樣品化合物的保留時間，在注射草莓果醬的樣品化合物的混合物頂空瓶子裝滿果醬瓊脂，一樣作為樣本瓶分析他們。進行分析7至10個樣品瓶，頂空瓶中該樣品化

18、合物以監(jiān)</p><p>　　2.4 使用揮發(fā)性有機物采樣吸附劑</p><p>　　在2,6 -二苯基氧化物（Tenax, TA,60至80網(wǎng)，Chrompack，米德爾堡，荷蘭）的基礎(chǔ)上一個100毫克的多孔聚合物樹脂的重量相當于從每玻璃管插與玻璃棉所得到的重量相當。該管的條件是通過與氦氣沖洗（130至190毫升每分鐘）220攝氏度30分鐘。含250毫升草莓果醬的一個玻璃瓶（500毫升）

19、接種2毫升含有懸浮每1 107毫升或無真菌孢子。該瓶用丁基橡膠隔膜密封，然后用一個條件吸附劑管該吸附劑管插入瓶中打開的端面對頂空瓶。該管的另一端用一個螺母和螺釘和聚四氟乙烯密封（Swagelok，克里夫蘭，美國）。管則留在該位置上7天，然后用吸附劑管所取代。刪除后，從頂空瓶子，該管的開口端的吸附劑蓋上一個螺母和螺釘和特氟隆密封。分析前該管在室溫下黑暗環(huán)境下不超過8天。</p><p>　　揮發(fā)性有機化合物是從用氦

20、管流在200攝氏度下加熱20分鐘的吸附劑脫附管與冷槽熱脫進樣（Chrompack，Middelburg, ，荷蘭）。在100攝氏度的氣相色譜分離之前揮發(fā)性有機物主要集中在冷槽。被注入的揮發(fā)性有機化合物的分析柱（惠普，揮發(fā)性有機化合物19091R-316,60米，內(nèi)徑0.32毫米，厚度1.8毫米）在2分鐘內(nèi)將冷槽從10至15攝氏度加熱至130攝氏度。運行下面的氣相色譜實施方案：35攝氏度3分鐘,以每分鐘10攝氏度的速度加熱至250攝氏度并

21、在250攝氏度時保持9分鐘。GC與MSD選區(qū)之間的溫度為270攝氏度,正收集質(zhì)譜掃描為m/z范圍從33至550。以國家標準與技術(shù)研究院NBS75k和Wiley138大規(guī)模使用譜庫在MSD化學(xué)工作站軟件（惠普1995）作為揮發(fā)性有機化合物的鑒定比較譜。</p><p>　　對于真菌產(chǎn)生的揮發(fā)性有機物，已知樣品化合物數(shù)額相對定量，1毫升標準乙醚稀釋后注入吸附劑的條件管以同樣的方式分析如真菌的揮發(fā)性有機化合物。真菌揮發(fā)

22、性有機物的數(shù)量，計算通過比較樣品那些樣品化合物的峰面積得出。真菌揮發(fā)性有機化合物中的3-甲基-1-丁醇和2-甲基-1-丁醇進行比較，以3-甲基-1-丁醇（99%），真菌2-戊醇及2-1-戊醇（99%），真菌和2-甲基-1-丙醇，乙酸乙酯和乙醇為2-甲基-1-丙醇（99%）所有都是向由默克公司購買（Whitehouse ，Station,，美國）。該真菌中的2-庚酮，二甲基丁酸和苯乙烯進行了比較,1-庚醇（99%，Egachemie, S

23、teinheim,，德國）</p><p><b>　　3 結(jié) 果</b></p><p>　　3.1真菌揮發(fā)性有機化合物的靜態(tài)頂空分析中的應(yīng)用方法</p><p>　　為了確定和量化所產(chǎn)生的揮發(fā)性有機物真菌，五個頂空瓶子裝滿了草莓果醬瓊脂后接種青霉菌株，枝孢菌95/113，黑曲霉VH10，曲霉藻VH12，毛霉plumbeus AK1和木霉VS

24、20。對該揮發(fā)性有機物進行采樣與靜態(tài)頂空法，分析與GC-MSD使用MSD篩選掃描模式和選擇離子監(jiān)測（SIM卡）對揮發(fā)性有機污染物進行定量。</p><p>　　選擇非接種和接種的草莓醬瓊脂離子色譜圖。在實驗過程中發(fā)現(xiàn)在非接種果醬瓊脂發(fā)現(xiàn)無揮發(fā)性有機物,在檢測接種青霉VS14的果醬中發(fā)現(xiàn)有真菌產(chǎn)生的揮發(fā)性有機化合物。</p><p>　　揮發(fā)性有機化合物中的3-甲基-1-丁醇，2－戊酮，1,

25、3 -戊二烯和苯乙烯的量為（見表2）。從20至5200納克/克3-甲基-1-丁醇測定已在草莓果醬瓊脂有2天的潛伏期。 3-甲基-1-丁醇發(fā)現(xiàn)在非接種草莓果醬，表明它是揮發(fā)性有機化合物真菌的起源。將3-甲基-1-丁醇在2至6天增加這表明在接種霉種的果醬中揮發(fā)性有機化合物制作后有2天潛伏期，9個真菌菌株中只有霉菌95/113不生產(chǎn)3-甲基-1-丁醇。</p><p>　　表2 22毫升頂空含草莓果醬瓶瓊脂真菌產(chǎn)生的

26、揮發(fā)性有機污染物濃度</p><p>　　2-戊酮是從33至110納克/克草莓果醬瓊脂中產(chǎn)生,在所有的10株真菌研究已有2天的潛伏期。 2－戊檢產(chǎn)生于非接種草莓果醬瓊脂。枝孢菌95/113產(chǎn)生2 -戊酮50納克/克，但沒有檢出1,3-戊二烯，3-甲基-1-丁醇，苯乙烯。因此，2－戊酮是在研究的所有10個真菌菌株中唯一的發(fā)現(xiàn)的化合物。</p><p>　　從黑曲霉,曲霉藻青霉VH10 青霉V

27、H12和木霉VS20五個菌株中生產(chǎn)的17至61納克/克1,3-戊二烯1， 320至710納克/克苯乙烯已經(jīng)有2天潛伏期（表2）。苯乙烯和1,3-戊二烯的產(chǎn)生都不被視為草莓果醬瓊脂中真菌生長的枝孢菌95/113潛在指標。</p><p>　　除了上述的揮發(fā)性有機化合物，在發(fā)霉的草莓醬瓊脂乙醇和丙酮經(jīng)常發(fā)現(xiàn)但沒有量化。用MSD與SIM卡模式對2-甲基 和3-甲基進行監(jiān)測，但在任何頂空瓶子沒有發(fā)現(xiàn)呋喃的跡象。</

28、p><p>　　3.2 分析真菌揮發(fā)性有機物吸附劑的應(yīng)用</p><p>　　要確認靜態(tài)頂空方法所取得的結(jié)果，并尋求其他產(chǎn)生真菌揮發(fā)性有機物的可能性，5個青霉株和其他3株真菌栽培瓶中加入草莓醬,吸附材料在頂空瓶子中維持7天初步確定收集的揮發(fā)性有機物與質(zhì)譜那些模型化合物或光譜庫進行比較。</p><p>　　在兩個草莓果醬瓶中共發(fā)現(xiàn)至少24個化合物。除所有檢測到的最常見的

29、化合物3種醇類，酯類，酮類或碳氫化合物。進行初步檢測認定揮發(fā)性有機物為乙基和甲基丁酸和己酸乙酯。</p><p>　　從非接種草莓果醬和接種草莓果醬中進行的等量測定他們不是這些化合物的表明真正起源。這九個最常發(fā)現(xiàn)，暫時鑒定出的化合物被懷疑是真菌的起源列于表3。在靜態(tài)頂空法中也發(fā)現(xiàn)這些揮發(fā)性有機物，三甲基-1-丁醇，2-戊酮，苯乙烯，乙醇。吸附劑的實驗結(jié)果表明，不僅是在用靜態(tài)頂空試驗時,草莓醬和草莓醬瓊脂中真菌也產(chǎn)

30、生這些化合物。</p><p>　　利用吸附劑檢測的方法而不是靜態(tài)頂空法所得的化合物為2-甲基-1-丙醇，二戊醇，醋酸乙酯，乙基-2-甲基丁酸和2-庚酮。其中只有2-庚酮是潛在的增長指標，因為沒有其他揮發(fā)性有機物所以由真菌產(chǎn)生的可能性最大。在非接種果醬也發(fā)現(xiàn)2-庚酮以及乙醇，但僅在首7天的潛伏期和較低比接種果醬數(shù)額，顯示這些揮發(fā)性有機物為真菌產(chǎn)物,懷疑其中有四株產(chǎn)生2-庚酮，8株產(chǎn)生乙醇。</p>

31、<p>　　1,3-戊二烯，與在靜態(tài)頂空法檢測到的化合物中的一致，吸附劑方法中并沒有發(fā)現(xiàn)。</p><p>　　表3從含有曲霉污染物的草莓果醬收集揮發(fā)性有機化合物表</p><p><b>　　4 討 論</b></p><p>　　在這項研究中我們發(fā)現(xiàn)了在草莓醬或草莓醬瓊脂有10種真菌產(chǎn)生的揮發(fā)性有機化合物在25株生長。產(chǎn)生的大部分

32、真菌化合物為2-戊酮由10株生產(chǎn),3-甲基-1-丁醇（9株），乙醇，苯乙烯和1,3-戊二烯（每8株）。Jelen, Krawczyk, Larsen, Jarosz, and Golebniak (2005)。在草莓果醬中真菌疫霉病菌生長而生產(chǎn)揮發(fā)性有機化合物的研究和檢測幾個苯基化合物，如苯乙醛，苯乙醇四乙基苯酚。</p><p>　　設(shè)計人懷疑病菌轉(zhuǎn)草莓酸降換成至4 - 乙基苯酚。在本研究中唯一的苯化合物檢出苯

33、乙烯。在非接種果醬是沒有發(fā)現(xiàn)苯乙烯的。斯蒂爾等人（1994年）發(fā)現(xiàn)草莓苯乙烯沒有任何可見的霉菌生長，但（0.37至3.1納克/克）小于1％的濃度在發(fā)霉的草莓果醬瓊脂衡量這項研究。真菌能轉(zhuǎn)換肉桂酸苯乙烯（Middelhoven& Gelpke, 1995; Shimada et al., 1992)栽培草莓已被證實含有高達0.5毫克/克，肉桂苯乙酸(Pyysalo, Honkanen, & Hirvi, 1979)，其中本

34、來可以在本研究發(fā)現(xiàn)苯乙烯來源。</p><p>　　真菌可以轉(zhuǎn)換為氧化脂肪酸。青霉菌菌株產(chǎn)生2-戊酮和甲基酮已被證明等基質(zhì)栽培時與脂肪含量高的像奶油(Larsen，1998年），或干椰肉油(Chalier & Crouzet, 1998)。草莓已被證實包含從0.85至1.2毫克/克1－己酸(Pyysalo，et al., 1979)，它可以是B-氧化脫羧2-戊酮。</p><p>

35、　　研究報告中只有少數(shù)的1,3-戊二烯為一種真菌代謝物。一些菌株青霉(Horwood, Lloyd,Ramshaw, & Stark, 1981; Kinderleler & Hatton, 1990)和酵母(Casas, Valderrama, & Peinado, 1999)是眾所周知的山梨酸對1,3-戊二烯。在一項由Sunesson等人研究（1995年）雜色曲霉產(chǎn)生的1,3-戊二烯在甘油瓊脂中無山梨酸。使用

36、草莓靜態(tài)頂空法在我們的研究草莓醬瓊脂中1,3-戊二烯檢測到無山梨酸，但果醬與吸附劑的方法不同。我們的研究方法與吸附劑,它已被證明(Sunesson et al, 1995a; Sunesson, Nilsson, & Andersson,1995b)的吸附劑和采樣條件類似我們在研究中所使用的檢測非極性適合揮發(fā)性有機物如1,3-戊二烯。如苯乙烯一些非極性揮發(fā)性有機物，2-甲基-1-戊烯，己烷和環(huán)己烷的檢測。因此，草莓果醬中沒有檢出

37、1,3-戊二烯這是不僅不可能是因為樣品收集和分析方法。而且是由于在不同pH值，水分含量和熱處理的草莓醬中1,3-戊二烯產(chǎn)生不同.</p><p>　　3-甲基-1-丁醇是一種常見的真菌揮發(fā)性有機化合物(e.g.Larsen and Frisvad, 1995; Schnu¨rer et al., 1999)。真菌能轉(zhuǎn)換亮氨酸或相應(yīng)的1-酮酸或2-酮基-3-甲基戊酸或3-甲基-1-丁醇（拉森，1998年b

38、）。在我們的研究中3-甲基-1-丁醇的生產(chǎn)晚于其他揮發(fā)性有機化合物。較低的氧含量在長時間的培養(yǎng)的瓶子可以對亮氨酸減少到3-甲基-1-丁醇。（Borjesson,Stollman, Adamek, and Kaspersson (1989)）。</p><p>　　發(fā)現(xiàn)了一個類似對3-甲基-1-丁醇厭氧真菌生產(chǎn)跡象的條件。草莓果醬真菌生長生產(chǎn)的乙醇。果醬中高含糖量和曝氣缺乏樣本瓶有可能現(xiàn)成的乙醇，生產(chǎn)成典型發(fā)酵產(chǎn)品

39、。有利于乙醇作為容器使用規(guī)模指標菌的生長,類似的情況也普遍存在于工業(yè)。它也是已知的，但是，未受破壞的草莓含有乙醇(Hirvi & Honkanen,1982; Pyysalo et al, 1979)，可能干擾污染物的檢測。</p><p>　　結(jié)果表明，第一次潛在的波動指標，在草莓果醬真菌的生長檢測到的揮發(fā)性有機物在這項研究可用于選拔和培養(yǎng)適用于工業(yè)用的嗅覺傳感器。</p><p&g