石河子地區(qū)犬瘟熱流行病學(xué)調(diào)查及流行株H基因遺傳變異分析.pdf

1、犬瘟熱(Caninedistemper,CD)是由犬瘟熱病毒(Caninedistempervirus,CDV)引起的犬科、鼬科和浣熊科動(dòng)物的一種急性、高度接觸性傳染病。該病在我國(guó)很多地區(qū)流行,給養(yǎng)犬業(yè)和皮毛動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　近幾年該病在石河子地區(qū)流行嚴(yán)重,并呈上升趨勢(shì),臨床癥狀、病理變化多樣且難以防控,死亡率高達(dá)80％以上,給石河子地區(qū)的寵物業(yè)帶來了嚴(yán)重的威脅。為了了解石河子地區(qū)CD流行情況及CDVH基因的變

2、異情況,本研究開展了以下工作:
　　1、石河子地區(qū)犬瘟熱流行病學(xué)調(diào)查
　　從流行病學(xué)、臨床癥狀、血清學(xué)、病例剖檢、病理組織學(xué)等五方面對(duì)2011~2012年石河子市防疫站、獸醫(yī)站、石河子大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院三家大型寵物診療機(jī)構(gòu)前來就診的2416只犬進(jìn)行了CD調(diào)查。調(diào)查結(jié)果表明2416只病犬中,初步診斷為犬瘟熱病的犬211只,占總數(shù)的8.73%。對(duì)初診為犬瘟熱的病犬跟蹤調(diào)查結(jié)果如下:①流行病學(xué):本病一年四季均有發(fā)生,但冬、春季發(fā)病較多;

3、不同年齡、性別和品種的犬均可感染,未成年的幼犬最為易感;純種犬比土種犬易感性高,而且病情重,死亡率高;未免疫的犬較免疫的犬發(fā)病率高。②臨床癥狀:石河子地區(qū)犬瘟熱臨床癥狀主要以混合型為主,其次是呼吸道型、消化道型、神經(jīng)型、皮膚型,各種類型基本有雙相熱的經(jīng)過。③血清學(xué):用膠體金試劑盒對(duì)病犬的眼分泌物、鼻液、唾液、血液的混合物進(jìn)行檢測(cè),共檢測(cè)出陽性病料211份。④病例剖檢:病犬全身淋巴結(jié)腫大、出血,尤其以腸系膜淋巴結(jié)最為明顯,胃腸道卡他性炎、

4、出血,胰腺萎縮,腦膜腦炎等典型癥狀,多數(shù)病犬肺臟充血、壞死,脾臟腫大、暗紅。⑤病理組織學(xué):肝細(xì)胞顆粒變性、脂肪變性、呈大量空泡狀;肺廣泛淤血,肺泡壁結(jié)構(gòu)消失,肺泡腔內(nèi)充滿巨噬細(xì)胞;脾淤血、出血,白髓幾乎消失,淋巴細(xì)胞明顯減少;淋巴結(jié)有明顯的萎縮、腫大,淋巴小結(jié)不明顯。
　　2、石河子地區(qū)犬瘟熱病毒流行株H基因的克隆及遺傳變異分析
　　根據(jù)發(fā)表的犬瘟熱病毒疫苗株Onderstepoort(EU143737.1)的H基因序列設(shè)計(jì)

5、了CDV檢測(cè)引物和全長(zhǎng)引物。通過RT-PCR方法用檢測(cè)引物從29份臨床疑似犬瘟熱的病料中檢測(cè)出7份陽性病料,再用全長(zhǎng)引物將陽性病料擴(kuò)增并測(cè)序,將所得序列分別命名為:CDVshz1、CDVshz2、CDVshz3、CDVshz4、CDVshz5、CDVshz6、CDVshz7。通過序列比對(duì),結(jié)果顯示7株H基因序列和疫苗株Onderstepoort(EU143737.1)的同源性分別為89.0%、89.4%、90.0%、89.7%、88.8

6、%、87.8%、89.2%,7株流行株在55、60、87、95等160多個(gè)位點(diǎn)存在不同程度的突變,其中55、186、452、1020、1107、1116、1350等位點(diǎn)變異較集中。由核苷酸推導(dǎo)出的氨基酸序列與疫苗株的同源性分別為:95.1%、95.3%、96.3%、94.4%、94.2%、94.2%、95.0%。應(yīng)用Predictprotien軟件預(yù)測(cè),流行株糖基化位點(diǎn)的個(gè)數(shù)、位置發(fā)生改變,CDVshz7有8個(gè)糖基化位點(diǎn),其它六株每株有

7、7個(gè)糖基化位點(diǎn),而參考株Onderstepoort只有4個(gè)糖基化位點(diǎn)。應(yīng)用ImmunomedicineGrioup軟件進(jìn)行抗原表位的預(yù)測(cè):Onderstepoort疫苗株有25個(gè)抗原表位,與疫苗株相比,CDVshz1有抗原表位26個(gè),與疫苗株相同的有5個(gè);CDVshz2有抗原表位26個(gè),與疫苗株相同的有7個(gè);CDVshz3有抗原表位25個(gè),有14個(gè)抗原表位發(fā)生了變異;CDVshz4的抗原表位有23個(gè),與疫苗株相同的有10個(gè),CDVshz