我國部分地區(qū)羊球蟲種類及梨形蟲病分子流行病學調(diào)查.pdf

1、寄生蟲病(Parasitic disease)是嚴重危害養(yǎng)羊業(yè)健康發(fā)展的主要疾病之一，而球蟲病(Coccidiosis)和梨形蟲病(Piroplasmosis)則是常見的寄生蟲病。這兩種疾病在世界范圍內(nèi)均有分布，綿羊和山羊均易感染。綿羊和（或）山羊感染球蟲（Coccidian）或梨形蟲（Piroplasma）后，生長發(fā)育遲緩和繁殖性能下降，羊肉、羊奶、羊毛（絨）、羊腸衣及皮革的產(chǎn)量和品質(zhì)均降低，嚴重時感染甚至死亡。該病在世界范圍內(nèi)造成了

2、巨大的經(jīng)濟損失，嚴重阻礙了綿羊和山羊養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。本研究從2011年1月至2012年11月，應(yīng)用飽和蔗糖溶液漂浮法和麥克馬斯特計數(shù)法對采自我國部分地區(qū)的2639份糞便樣品進行了檢查，對球蟲陽性樣品中的球蟲卵囊進行收集和培養(yǎng)，并對球蟲種類進行了鑒定。應(yīng)用基于梨形蟲18S rRNA基因序列的PCR對采自我國部分地區(qū)的465份血液樣品進行了檢查，并對梨形蟲陽性樣品進行蟲種鑒定和種系進化分析。
　　1.為了解我國部分地區(qū)羊球蟲種類感染

3、情況，為羊球蟲病的防制提供科學的參考和依據(jù)，于2011年1月至2012年11月，應(yīng)用飽和蔗糖溶液漂浮法和麥克馬斯特計數(shù)法對采自河南省部分地區(qū)、安徽省合肥市、重慶市云陽縣、遼寧省朝陽市、吉林省雙遼市、山東省東營市、內(nèi)蒙古自治區(qū)烏蘭察布市商都縣和錫林郭勒盟蘇尼特右旗、貴州省貴陽市花溪區(qū)和黔西南布依族苗族自治州晴隆縣、云南省昆明市等23個縣市的2639份糞便樣品（其中綿羊糞便樣品1150份，山羊糞便樣品1489份）進行了檢查，對球蟲陽性樣品中

4、的球蟲卵囊進行收集和培養(yǎng)，并對球蟲種類進行了鑒定。結(jié)果，球蟲總感染率為95.72％(2526/2639)，其中綿羊球蟲感染率為96.43％（1109/1150），山羊球蟲感染率為95.16％(1417/1489);共檢出13種綿羊艾美爾球蟲和12種山羊艾美爾球蟲，綿羊艾美爾球蟲分別為阿撒他艾美爾球蟲(Ei meriaahsata)、巴庫艾美爾球蟲(E.bakuensis)、小型艾美爾球蟲(E.parva)、貢氏艾美爾球蟲(E.gonza

5、lezi）、蒼白艾美爾球蟲（E.pallida）、顆粒艾美爾球蟲（E.granulose）、溫布里吉艾美爾球蟲(E.weybridg ensis)、類綿羊艾美爾球蟲(E.ovinoidalis)、馬西卡艾美爾球蟲(E.marsica)、槌形艾美爾球蟲（E.crandallis）、錯亂艾美爾球蟲(E.intricale)、浮氏艾美爾球蟲(E.faurei）和斑點艾美爾球蟲(E.punc(lala))，山羊艾美爾球蟲分別為阿普艾美爾球蟲(E

6、.apsheronica)、阿氏艾美爾球蟲（E.arloingi）、艾麗艾美爾球蟲（E.alijevi)、斑點艾美爾球蟲(E.puncta(l)a)、蒼白艾美爾球蟲(E.pallida)、家山羊艾美爾球蟲(E.hirci)、柯察艾美爾球蟲（E.kocharli）、克氏艾美爾球蟲(E.chrislensseni)、妮氏艾美爾球蟲(E.ninakohlyakimovae)、山羊艾美爾球蟲(E.caprina）、羊艾美爾球蟲(E.caprov

7、ina）和約奇艾美爾球蟲（E.jolchiijevi）。羊球蟲多為混合感染，其中綿羊為81.19％(807/994)，山羊為71.39％(604/846);綿羊混合感染2～10種艾美爾球蟲，優(yōu)勢蟲種為馬爾西卡艾美爾球蟲、巴庫艾美爾球蟲和小型艾美爾球蟲;山羊混合感染2～9種艾美爾球蟲，優(yōu)勢蟲種為家山羊艾美爾球蟲、阿氏艾美爾球蟲、克氏艾美爾球蟲和艾麗艾美爾球蟲。不同地區(qū)、不同年齡、不同月份、不同品種、不同飼養(yǎng)方式的綿羊和山羊感染的球蟲種類不

8、一，感染率也不相同，但優(yōu)勢蟲種基本一致。本研究首次對湖羊球蟲及其種類和不同月份羊球蟲種類進行了調(diào)查。研究表明，綿羊和山羊球蟲感染普遍，且多為混合感染，嚴重感染時可導致疾病的發(fā)生，在生產(chǎn)中，我們應(yīng)該采取綜合的防制措施來防止羊球蟲病的發(fā)生，將其帶來的損失降到最低。
　　2.為了解我國部分地區(qū)羊梨形蟲感染情況及其分子流行病學特征，為羊梨形蟲病的防制提供科學的參考和依據(jù)，于2011年11月至2012年11月應(yīng)用血液涂片姬姆薩染色鏡檢法和P

9、CR（常規(guī)PCR和巢式PCR）對采自河南省部分地區(qū)、貴州省貴陽市花溪區(qū)和黔西南布依族苗族自治州晴隆縣、云南省昆明市、山西省運城市萬榮縣、內(nèi)蒙古自治區(qū)烏蘭察布市商都縣和錫林郭勒盟蘇尼特右旗等22縣市的465份羊血液樣品進行了檢查。結(jié)果，血液涂片姬姆薩染色鏡檢法共檢出52份梨形蟲陽性樣品，感染率為11.18％(52/465);PCR共檢出78份梨形蟲陽性樣品，感染率為16.77％(78/465)。應(yīng)用特異性引物進行PCR擴增后證明，所分離的

10、羊梨形蟲為呂氏泰勒蟲（Theilerialuwenshuni）和莫氏巴貝斯蟲（Babesia motasi）。研究表明，PCR比血液涂片姬姆薩染色鏡檢法更敏感，更特異，能夠鑒定到蟲種并能檢出血涂片鏡檢呈陰性的羊梨形蟲陽性樣品;共檢出2種梨形蟲，即呂氏泰勒蟲和莫氏巴貝斯蟲。
　　3.為確定我國部分地區(qū)羊梨形蟲分離株的種類，將分離的78株呂氏泰勒蟲基因序列和8株莫氏巴貝斯蟲基因序列分別在NCB（l）中進行Blast比對，下載相關(guān)核糖核

11、酸序列，應(yīng)用Clustal X2.11軟件分別進行比對及序列拼接，應(yīng)用 DNAStar7.5軟件進行同源序列分析，應(yīng)用 Clustal X2.11和MEGA5.0等生物學軟件分別對泰勒蟲基因序列和巴貝斯蟲基因序列進行比對并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進化樹。結(jié)果，Blast比對和同源性分析時，分離的78株呂氏泰勒蟲與 T.huwenshuni(KC429038.1)的同源性為100％;在構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進化樹上,分離的78株呂氏泰勒蟲與 T.huwens