利多卡因心肌保護(hù)作用與一氧化氮關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、利多卡因是臨床上常用的一種抗心律失常藥和局部麻醉藥。雖然利多卡因抗缺血再灌注損傷的確切機(jī)制目前尚不明確，但是研究表明利多卡因可改善缺血再灌注心肌組織的能量代謝，抑制缺血再灌注心肌細(xì)胞內(nèi)的Na+和Ca2+超載，抑制中性粒細(xì)胞的粘附聚集，減小缺血再灌注心肌的梗死面積。 作為一種重要的細(xì)胞內(nèi)信使分子和化學(xué)遞質(zhì)，NO在心肌缺血再灌注中的作用一直是人們研究的熱點(diǎn)。在正常生理情況下，NO主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞的eNOS催化合成。研究表明，NO具

2、有舒張血管、抑制血小板粘附聚集、抑制血管平滑肌增殖、抑制中性粒細(xì)胞粘附聚集、抗Ca2+超載等作用。NO生成不足或過(guò)多均可加重心肌的缺血再灌注損傷。 本課題針是對(duì)利多卡因的心肌保護(hù)作用與NO的關(guān)系進(jìn)行了研究，旨在進(jìn)一步探討利多卡因心肌保護(hù)作用的機(jī)制。本研究共包括以下三個(gè)部分。 第一部分利多卡因?qū)θ毖俟嘧⑿募”Ｗo(hù)作用的研究采用健康雄性Wistar大鼠，經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg實(shí)施麻醉。所有大鼠均經(jīng)歷90min的局

3、部缺血(LAD結(jié)扎)和120min的再灌注，并隨機(jī)分為4組：G1組，未給予任何干預(yù)；G2組，在缺血前60min開(kāi)始靜脈應(yīng)用利多卡因直至缺血前20min；G3組，缺血前10min開(kāi)始靜脈應(yīng)用利多卡因直至缺血后50min；G4組，在再灌注前10min開(kāi)始靜脈應(yīng)用利多卡因直至再灌注后50min。利多卡因的應(yīng)用方法是首先經(jīng)股靜脈給予2mg/kg的負(fù)荷劑量，然后再以100μg/kg/min的速度持續(xù)輸注。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中連續(xù)監(jiān)測(cè)心率(HR)、平均動(dòng)脈壓

4、(MAP)和Ⅱ?qū)?lián)心電圖(ECG)；在缺血前即刻、缺血末和再灌注末分別抽取動(dòng)脈血，測(cè)定CK-MB血漿濃度；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定心肌梗死面積。 結(jié)果顯不，與G1組相比，G2和G4組在缺血30min、60min、90min和冉灌注30min、60min、90min、120min時(shí)的HR、MAP和血壓-心率乘積(RPP)以及缺血期間前30min的心律失常情況、缺血末和再灌注末的CK-MB血漿濃度、心肌梗死面積均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，

5、但G3組的MAP和RPP出現(xiàn)顯著性降低的時(shí)間推遲了大約30min，缺血期前30minPVB和陣發(fā)性二聯(lián)律的發(fā)生次數(shù)顯著性增加(P＜0.05)，VT-VF的總持續(xù)時(shí)間明顯縮短(P＜0.05)，缺血末和再灌注末的CK-MB血漿濃度明顯較低(P＜0.05)，心肌梗死面積明顯減小(P＜0.05)。 第二部分利多卡因?qū)θ毖俟嘧⑿募?nèi)源性NO生成系統(tǒng)的影響采用健康雄性Wistar大鼠，經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg實(shí)施麻醉，然后給予9

6、0min的局部缺血(LAD結(jié)扎)和120min的再灌注處理，并隨機(jī)分為2組：G1組，未給予任何干預(yù)；G2組，在缺血前10min經(jīng)股靜脈給予負(fù)荷劑量的利多卡因2mg/kg，然后以100μg/kg/min的速率持續(xù)輸注直至缺血后50min。分別在缺血30min、60min、90min和再灌注30min、60min和120min時(shí)切取動(dòng)物心臟，采用電化學(xué)微傳感器法測(cè)定LAD供應(yīng)區(qū)心肌組織的NO代謝產(chǎn)物含量，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)和蛋白印跡技術(shù)定

7、位、定量分析LAD供應(yīng)區(qū)心肌組織eNOS和iNOS的表達(dá)。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)選取6只大鼠。另取6只大鼠的心臟作正常對(duì)照。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中連續(xù)監(jiān)測(cè)HR、MAP和Ⅱ?qū)?lián)ECG。 電化學(xué)法的測(cè)定結(jié)果顯示，在缺血30min、60min和再灌注30min、60min、120min時(shí)，G2組心肌組織NO代謝產(chǎn)物的含量明顯高于G1組(P＜0.05)，但在缺血90min時(shí)，兩組心肌組織NO代謝產(chǎn)物的含量無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。與正常值相比，在缺血30m

8、in時(shí)，G2組心肌組織NO代謝產(chǎn)物的含量無(wú)顯著性改變(P＞0.05)，而G1組心肌組織NO代謝產(chǎn)物的含量卻顯著性降低(P＜0.05)。eNOS主要是分布在心內(nèi)膜下和心臟內(nèi)的小血管周?chē)毖诤驮俟嘧⑵谛募〗M織eNOS的免疫組織化學(xué)陽(yáng)性物質(zhì)顯著性減少。蛋白印跡分析結(jié)果顯示，與正常心肌組織的eNOS表達(dá)量相比，在缺血30min時(shí)，兩組心肌組織的eNOS含量均無(wú)顯著性改變(P＞0.05)，但是在隨后的各個(gè)測(cè)定時(shí)間點(diǎn)均顯著性降低(P＜0.05)

9、，而且在各個(gè)測(cè)定時(shí)間點(diǎn)G2組心肌組織的eNOS含量顯著性高于G1組(P＜0.05)；與缺血90min時(shí)的eNOS含量相比，再灌注60min和120min時(shí)兩組心肌組織的eNOS含量均顯著性降低(P＜0.05)。在各個(gè)測(cè)定時(shí)間點(diǎn)，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)和蛋白印跡技術(shù)均未獲得iNOS表達(dá)的陽(yáng)性結(jié)果。 第三部分利多卡因心肌保護(hù)作用與NO相關(guān)性的研究采用健康雄性Wistar大鼠，經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg實(shí)施麻醉。所有大鼠均經(jīng)歷9

10、0min的局部缺血(LAD結(jié)扎)和120min的再灌注，并隨機(jī)分為4組：GNS組，未給予任何干預(yù)；GLI組，在缺血前10min經(jīng)股靜脈給予負(fù)荷劑量的利多卡因2mg/kg，然后以100μg/kg/min的速率持續(xù)輸注直至缺血后50min；GLN組，在缺血前30min開(kāi)始經(jīng)股靜脈以200μg/kg/min的速率持續(xù)輸注L-NAME直至LAD結(jié)扎；GLL組，在缺血前30min開(kāi)始經(jīng)股靜脈以200μg/kg/min的速率持續(xù)輸注L-NAME，直

11、至LAD結(jié)扎，而且在缺血前10min經(jīng)股靜脈給予負(fù)荷劑量的利多卡因2mg/kg并以100μg/kg/min的速率持續(xù)輸注直至缺血后50min。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中連續(xù)監(jiān)測(cè)HR、MAP和Ⅱ?qū)?lián)ECG；在缺血前即刻、缺血末和再灌注末分別抽取動(dòng)脈血，測(cè)定CK-MB的血漿濃度；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定心肌梗死面積。 結(jié)果顯示，與基礎(chǔ)值相比，GLN和GLL組缺血前即刻的MAP顯著性升高(P＜0.05)，但在缺血30min時(shí)，它們的MAP與其他兩組沒(méi)有顯著性差

12、異(P＞0.05)。在再灌注90min和120min時(shí)，GLI組的MAP明顯高于其他三組，而且GLI組的RPP顯著性高于GLN組(P＜0.05)。GLI組VT-VF的總持續(xù)時(shí)間為73±25s，明顯短于其他三組(P＜0.05)。與GNS組相比，GLN組的VT發(fā)生次數(shù)顯著性增加，VT-VF的總持續(xù)時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P＜0.05)。與GLN組相比，GLL組VT-VF的總持續(xù)時(shí)間顯著性縮短(P＜0.05)。與GNS組相比，GLI組缺血末和再灌注末的

13、CK-MB血漿濃度及心肌梗死面積顯著性減小，而GLN組再灌注末的CK-MB血漿濃度和心肌梗死面積顯著性升高(P＜0.05)。與GLN組相比，GLL組再灌注末的CK-MB血漿濃度和心肌梗死面積顯著性減小(P＜0.05)。 通過(guò)本研究，我們得出以下結(jié)論：1.利多卡因無(wú)藥理性預(yù)處理作用，但具有抗缺血效應(yīng)，再灌注期應(yīng)用利多卡因無(wú)心肌保護(hù)作用。 2.缺血期應(yīng)用利多卡因可顯著性改善缺血再灌注心肌組織NO的產(chǎn)生和eNOS的表達(dá)。