流感病毒感染與細胞自噬間相互作用的研究.pdf

1、自噬是真核細胞內(nèi)降解長半衰期蛋白和胞漿中器官的重要途徑。自噬的調(diào)節(jié)是一個復(fù)雜的過程，大量的胞內(nèi)外刺激以及病原體的侵入都可以伴隨細胞自噬的發(fā)生?，F(xiàn)在已證實自噬在RNA病毒的復(fù)制過程中發(fā)揮重要作用。流感病毒是一種RNA病毒，它的感染可以引起細胞內(nèi)信號發(fā)生一系列的變化，但是有關(guān)流感病毒感染和細胞自噬間的關(guān)系仍未見報道。本試驗通過運用對自噬泡特異性標記物GFP-LC3陽性點數(shù)的統(tǒng)計、自噬泡示蹤劑MIX2染色以及研究自噬最經(jīng)典的方法電鏡技術(shù)來監(jiān)測

2、流感病毒感染后細胞自噬活性的變化，結(jié)果證實了A型流感病毒感染可以誘導(dǎo)細胞自噬活性的增強。為了證實自噬在流感病毒感染過程中的作用，我們運用細胞自噬的抑制劑3-MA，wortmannin抑制細胞的自噬后感染流感病毒，結(jié)果發(fā)現(xiàn)流感病毒效價降低；同時，為了進一步驗證這一結(jié)果，我們運用自噬泡形成過程中必需的兩個自噬基因LC3和Beclin 1的siRNA，轉(zhuǎn)染A549細胞干擾掉細胞中內(nèi)源性自噬基因LC3和Beclin 1的表達，再感染流感病毒，結(jié)

3、果發(fā)現(xiàn)流感病毒的效價明顯下降。從而證明細胞中自噬的存在為流感病毒的感染提供了有利的條件。然而，令人感興趣的是當我們使用自噬的促進劑Raparnycin誘導(dǎo)細胞的自噬后再感染病毒，我們并沒有發(fā)現(xiàn)病毒效價的增高，反而是降低。通過使用MDC染色和Lysotraeker-Red染色的方法來監(jiān)測細胞的自噬活性和溶酶體活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當用自噬的誘導(dǎo)劑Rapamycin處理細胞后再感染病毒，在細胞自噬活性增強的同時，細胞的溶酶體活性也顯著增強；而單獨病