三聚氰胺與三聚氰胺混合暴露毒理學(xué)效應(yīng)的研究.pdf

1、近來(lái)，北美發(fā)生的寵物食品三聚氰胺污染事件和中國(guó)奶粉含三聚氰胺事件又一次觸動(dòng)人們對(duì)食品安全的關(guān)注。三聚氰胺是用于工業(yè)制造塑料等用品的原料，卻由于其含氮量高達(dá)66.7％，而被添加到乳制品中，造成產(chǎn)品中蛋白含量增高的假象。研究表明，三聚氰胺本身是低毒性的，之所以會(huì)導(dǎo)致腎毒性的發(fā)生，是由于上述食品中含有三聚氰胺的同系物三聚氰酸，兩者共存時(shí)形成復(fù)合物，堵塞腎小管，導(dǎo)致急性腎毒性的發(fā)生。目前，有關(guān)三聚氰胺及三聚氰酸各自的毒性已有研究，但三聚氰胺與三

2、聚氰酸混合暴露的毒理學(xué)效應(yīng)尚不明確。
　　 混合暴露指兩種或兩種以上的毒物同時(shí)或短時(shí)間內(nèi)先后作用于機(jī)體，這樣產(chǎn)生的毒性不一定是兩種毒物自身毒性的簡(jiǎn)單加和作用。因此，我們從細(xì)胞毒性和遺傳毒性兩個(gè)方面研究三聚氰胺與三聚氰酸混合暴露所產(chǎn)生的毒理學(xué)效應(yīng)。有毒物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變，即為細(xì)胞毒性.細(xì)胞是生物體新陳代謝的基本單位，所以對(duì)于細(xì)胞毒性的研究很重要。另一方面，環(huán)境中的有毒物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體，導(dǎo)致遺傳信息的載體-DNA結(jié)構(gòu)

3、的改變或遺傳物質(zhì)的損失，即產(chǎn)生所謂的遺傳毒性。遺傳毒性直接影響的是DNA，導(dǎo)致親代的信息在遺傳給子代時(shí)出現(xiàn)缺陷，不能保持遺傳性狀的穩(wěn)定性，因此，有關(guān)遺傳毒性的研究也非常重要。
　　 針對(duì)以上問(wèn)題，我們利用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞毒性，用不同濃度的三聚氰胺，三聚氰酸分別處理人胚腎細(xì)胞(293細(xì)胞)，低劑量單獨(dú)作用(0.5 mg/mL)時(shí)，兩者都沒(méi)有明顯的細(xì)胞毒性，但隨濃度增高細(xì)胞毒性逐漸增強(qiáng)，達(dá)到5mg/mL時(shí)，尤其到24h處理結(jié)束后，

4、5mg/mL的三聚氰酸細(xì)胞存活率接近陽(yáng)性對(duì)照組(H2O2)。因此，我們選用0.5mg/mL作為混合暴露的終劑量，分析相同濃度的三聚氰胺與三聚氰酸在不同體積比100∶1，10∶1，1:10，1∶100(v∶v)混合暴露作用于293細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)胞毒性和遺傳毒性。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，三聚氰胺與三聚氰酸體積比為100∶1和10:1時(shí)，細(xì)胞活性在2h時(shí)有所下降，但之后逐漸恢復(fù)到對(duì)照組水平。三聚氰胺與三聚氰酸體積比為1∶10時(shí)呈現(xiàn)類似趨勢(shì)，但細(xì)胞

5、活性下降趨勢(shì)更明顯；1∶100時(shí)，細(xì)胞存活率急劇下降，接近陽(yáng)性對(duì)照的水平。繼而我們又研究了三聚氰胺與三聚氰酸混合暴露的遺傳毒性，通過(guò)γH2AX焦點(diǎn)免疫熒光方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，三聚氰胺或三聚氰酸單獨(dú)作用時(shí)，不會(huì)造成DNA損傷，但是，當(dāng)三聚氰胺與三聚氰酸體積比為100∶1的混合物處理293細(xì)胞24h后，含有γH2AX焦點(diǎn)數(shù)大于20個(gè)的細(xì)胞比例顯著的高于空白對(duì)照組，說(shuō)明這一情況下的混合暴露對(duì)細(xì)胞造成了DNA損傷；但其它比例混合暴露處理后與對(duì)照組相比

6、沒(méi)有顯著的差異。而另一檢測(cè)遺傳毒性的經(jīng)典方法-堿性彗星實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，三聚氰胺或三聚氰酸單獨(dú)作用時(shí)，沒(méi)有彗星拖尾現(xiàn)象，說(shuō)明不存在DNA損傷，但是當(dāng)三聚氰胺與三聚氰酸按體積比分別為100∶1，10∶1，1∶10，和1∶100混合暴露處理后細(xì)胞都產(chǎn)生了與空白對(duì)照組相比顯著的拖尾現(xiàn)象，說(shuō)明當(dāng)三聚氰胺與三聚氰酸混合暴露后會(huì)造成DNA損傷。雖然免疫熒光方法和堿性彗星實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不完全一致，這可能是由于兩種方法的實(shí)驗(yàn)原理和判定DNA損傷的指標(biāo)不同