尼卡地平聯(lián)合異丙酚預(yù)處理對沙鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的探討尼卡地平聯(lián)合異丙酚預(yù)處理對缺血后再灌注神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響以驗(yàn)證其保護(hù)作用,并檢測經(jīng)尼卡地平和異丙酚聯(lián)合預(yù)處理后的沙土鼠腦組織中抑凋亡基因Bcl-2的表達(dá)以揭示其保護(hù)機(jī)制.方法采用夾閉沙土鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈造成腦缺血模型.50只健康成年沙土鼠隨機(jī)分成五組,每組各10只:假手術(shù)對照組(A組):分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈;腦缺血對照組(B組):分離暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈,麻醉減淺后用無創(chuàng)動(dòng)脈夾同時(shí)阻斷雙側(cè)腦血流5min后松開動(dòng)脈夾恢復(fù)血流,再灌注72h;

2、尼卡地平預(yù)處理組(C組):血流阻斷前30min靜脈注射尼卡地平0.2mg/kg;異丙酚預(yù)處理組(D組):腦缺血前30min腹腔注射異丙酚100mg/kg;尼卡地平聯(lián)合異丙酚預(yù)處理組(E組):缺血前30分鐘靜脈給予尼卡地平0.2mg/kg,同時(shí)腹腔注射異丙酚100mg/kg,后三組在全腦缺血5分鐘后分別再灌注72h.五組小鼠均腹腔注射3﹪戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉,并監(jiān)測肛溫,維持體溫于36~38℃.實(shí)驗(yàn)終末,斷頭取腦,石蠟切片.應(yīng)用分

3、子生物學(xué)方法- -脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)原位標(biāo)記缺血神經(jīng)元DNA片段檢測凋亡細(xì)胞,采用SP法進(jìn)行Bcl-2的免疫組織化學(xué)染色.光鏡下觀察TUNEL陽性細(xì)胞及Bcl-2免疫反應(yīng)的結(jié)果.計(jì)算10個(gè)高倍鏡視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,總計(jì)1000個(gè)細(xì)胞,計(jì)算出平均陽性率,即得