HeLa細(xì)胞中miR-106a、miR-376a和miR-485-5p對靶基因CDH1調(diào)控實驗研究.pdf

1、細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是指具有極性的上皮細(xì)胞向具有運動能力的間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過程。腫瘤的侵襲和遷移與EMT過程密切相關(guān)，是生物分子（如蛋白、核酸等）相互作用的復(fù)雜過程。大量實驗研究表明:microRNA(miRNA)在腫瘤細(xì)胞的EMT過程中起著十分重要的作用，是當(dāng)前研究腫瘤的侵襲和遷移機理的熱門課題之一。
　　本文針對宮頸腫瘤HeLa細(xì)胞的EMT過程，利用生物信息方法，從理論上篩選出HeLa細(xì)胞EMT過程中一些起重要作用的m

2、iRNA:miR-106a、miR-376a和miR-485-5p;利用分子生物實驗方法，研究了miRNA對關(guān)鍵靶基因CDH1的調(diào)控作用機理。主要研究工作和成果如下:
　　(1)首先，用生物信息學(xué)方法(miRanda、TargetScan、FindTar、PicTar和miRBase)，從理論上預(yù)測出一批EMT過程中與關(guān)鍵鈣黏蛋白靶基因CDH1堿基互補的miRNA分子;從中篩選出miR-106a、miR-376a和miR-485-

3、5p作為研究對象。這些miRNA對靶基因CDH1具有下調(diào)作用，即能抑制鈣黏蛋白的表達，對HeLa細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力有重要影響。
　　(2)其次，利用分子生物學(xué)實驗方法，構(gòu)建了含有miR-106a、miR-376a、miR-485-5p和CDH1基因的3'UTR區(qū)的質(zhì)粒;將miRNA質(zhì)粒和mRNA質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到HeLa細(xì)胞;對細(xì)胞進行熒光蛋白表達譜分析檢測含有CHD1的3'UTR區(qū)的質(zhì)粒的熒光表達量進行分析。
　　(3)最后，利