馬尾松苗抗松材線蟲病評(píng)價(jià)及失活線蟲分離新技術(shù)研究.pdf

1、松材線蟲病是松樹的一種毀滅性病害，培育出高抗的馬尾松苗在林業(yè)建設(shè)上具有積極的意義。廣東省馬尾松的種植，主要以信宜市的馬尾松高脂松為主，該馬尾松苗被認(rèn)為是抗性松苗已被大面積種植，但在廣東本地未見對(duì)其抗性評(píng)價(jià)的報(bào)道，因此，急需建立一套馬尾松苗抗松材線蟲病的抗性評(píng)價(jià)技術(shù)。本研究選取廣東省林業(yè)科學(xué)研究院苗圃的信宜馬尾松生產(chǎn)用苗，采用“截枝套管法”對(duì)接種過和未接種過松材線蟲的三年生馬尾松苗分別進(jìn)行人工接種松材線蟲，通過觀察其癥狀和檢測(cè)松木內(nèi)所含線

2、蟲數(shù)量，評(píng)價(jià)其對(duì)松材線蟲病的抗性。因抗性評(píng)價(jià)中存在大量的樣本需要分離松材線蟲，傳統(tǒng)松材線蟲的分離方法只能分離具有活性的松材線蟲，本研究針對(duì)抗性評(píng)價(jià)中大量樣本不能及時(shí)分離的問題，建立了馬尾松內(nèi)失活線蟲的分離技術(shù)，并對(duì)此技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)行了探討，取得了如下創(chuàng)新性成果：
　　1.發(fā)現(xiàn)了三年生馬尾松苗單株發(fā)病癥狀特點(diǎn)：
　?。?）側(cè)枝、頂部或主枝開始發(fā)病，隨即病情蔓延至全株；（2）有些癥狀只出現(xiàn)在植株的頂部、側(cè)枝或主枝上，發(fā)病部位針葉黃

3、化或變褐，病情無擴(kuò)展；（3）整株針葉先褪綠，后逐漸枯死。
　　2.優(yōu)化了三年生馬尾松苗對(duì)松材線蟲病的抗性評(píng)價(jià)技術(shù)。接種122 d后，將三年生馬尾松苗的抗性分為5個(gè)等級(jí)，每個(gè)等級(jí)間癥狀差異顯著。0級(jí)，高抗，馬尾松苗無發(fā)病癥狀；1級(jí)，中抗，馬尾松苗1/4以下針葉變黃，接種后期（118 d左右）開始發(fā)病，再過2-4d可達(dá)到1級(jí)癥狀；2級(jí)，低抗，馬尾松苗2/4-3/4針葉變黃、1/4以下針葉變紅，中后期（100 d左右）開始發(fā)病，再過6-

4、8 d可達(dá)到2級(jí)癥狀；3級(jí)，感病，馬尾松苗3/4左右針葉變紅，接種20 d即可發(fā)病，再過14 d可達(dá)到3級(jí)癥狀；4級(jí)，高感，馬尾松苗全株枯死，接種前期（8-20 d）開始發(fā)病，再過5-30 d即死亡。在此基礎(chǔ)上同時(shí)對(duì)不同抗性等級(jí)松苗內(nèi)線蟲的平均含量進(jìn)行測(cè)定，研究結(jié)果表明，隨著三年生馬尾松苗發(fā)病癥狀的不斷擴(kuò)展，線蟲含量逐漸增多；植株完全枯死后，枯死馬尾松內(nèi)松材線蟲因缺少水分而部分死去，線蟲含量隨之降低。
　　3.三年生馬尾松苗抗性存

5、在明顯分化。統(tǒng)計(jì)接種122 d時(shí)馬尾松苗等級(jí)數(shù)的研究結(jié)果表明，初次接種的13棵三年生馬尾松苗的0級(jí)、1級(jí)、2級(jí)、3級(jí)和4級(jí)發(fā)病等級(jí)的松苗數(shù)分別為5、1、2、2和3棵，其發(fā)病率和死亡率分別為61.54％和30.77％；第二次接種的6棵三年生馬尾松苗的0級(jí)、1級(jí)、2級(jí)、3級(jí)和4級(jí)發(fā)病等級(jí)的松苗數(shù)分別為4、1、0、0和1棵，其發(fā)病率和死亡率分別為33.33％和16.67％。二次接種較初次接種的馬尾松苗對(duì)松材線蟲的抗性強(qiáng)，表明馬尾松苗期種植前的

6、抗性篩選很有必要。
　　4.建立了馬尾松病木內(nèi)失活線蟲的分離技術(shù)，成功將失活松材線蟲分離出來，并且酶解出來的松材線蟲形態(tài)完整，可用于松材線蟲計(jì)數(shù)和PCR鑒定。
　　5.優(yōu)化了馬尾松病木內(nèi)失活線蟲的分離參數(shù)。確定了冰凍、常溫和低溫材料的最適酶解濃度分別為0.005/0.001 mg/μL、0.01/0.002 mg/μL和0.005/0.001 mg/μL，同時(shí)冰凍、常溫和低溫材料的最適酶解時(shí)間同為6h。
　　6.確定了