苦瓜素Ⅰ和Ⅱ?qū)喼抻衩酌獫{蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、苦瓜素類(lèi)化合物是從苦瓜莖葉中分離純化出的一類(lèi)葫蘆烷型四環(huán)三萜類(lèi)具殺蟲(chóng)活性的化合物，包括苦瓜素Ⅰ、苦瓜素Ⅱ和苦瓜皂苷元L等。研究表明，這些化合物對(duì)多種農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)的取食、產(chǎn)卵和生長(zhǎng)發(fā)育有抑制作用，但對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)血漿蛋白的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　為了探究苦瓜素類(lèi)化合物對(duì)亞洲玉米螟生長(zhǎng)發(fā)育影響的作用機(jī)理，以期為亞洲玉米螟的防治和新型殺蟲(chóng)劑的研制提供科學(xué)的依據(jù)，本文通過(guò)測(cè)定苦瓜葉正丁醇萃取物和苦瓜素Ⅰ對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)體重增長(zhǎng)的抑制作用及其對(duì)

2、能量物質(zhì)代謝的影響，確定了苦瓜素類(lèi)化合物對(duì)害蟲(chóng)的作用方式為抑制其生長(zhǎng)發(fā)育。進(jìn)一步測(cè)定了苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ等苦瓜素類(lèi)化合物對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)離體酚氧化酶活性的抑制作用及其對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)血漿蛋白表達(dá)的影響，研究結(jié)果如下：
　　1.苦瓜葉正丁醇萃取物對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)能量物質(zhì)代謝的影響
　　采用飼料混藥法，測(cè)定了苦瓜正丁醇萃取物對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)能量物質(zhì)的影響?？喙先~正丁醇萃取物對(duì)幼蟲(chóng)體重增長(zhǎng)抑制率隨著處理濃度的增加而升高?？喙先~正丁

3、醇萃取物在處理的3d內(nèi)，幼蟲(chóng)血淋巴總蛋白的含量顯著降低，總糖含量明顯增加，但對(duì)幼蟲(chóng)脂質(zhì)含量的影響不明顯。
　　2.苦瓜素Ⅰ對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)能量物質(zhì)代謝的影響
　　采用飼料混藥法，測(cè)定了苦瓜素Ⅰ對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)能量物質(zhì)的影響，結(jié)果表明苦瓜素Ⅰ對(duì)幼蟲(chóng)體重的增加有顯著的抑制作用。苦瓜素Ⅰ可顯著降低幼蟲(chóng)血淋巴總蛋白含量，但對(duì)幼蟲(chóng)血淋巴總糖含量的影響不顯著。
　　3.苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ?qū)喼抻衩酌紫x(chóng)離體酚氧化酶活性的影響

4、>　　采用硫酸銨沉淀法對(duì)亞洲玉米螟酚氧化酶進(jìn)行純化，得到的初純化的離體酚氧化酶酶純化倍數(shù)為2.50，酶活力回收率為92.61％。采用酶標(biāo)儀微量法，以左旋多巴為底物，首先測(cè)定了丙酮、甲醇、乙醇、二甲基亞砜等幾種常用有機(jī)溶劑對(duì)離體酚氧化酶活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)二甲基亞砜含量小于7.5%時(shí)，亞洲玉米螟幼蟲(chóng)離體酚氧化酶的相對(duì)活力在97%以上，對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)離體酚氧化酶活性的影響最小。隨后，將苦瓜素Ⅰ、苦瓜素Ⅱ分別溶于二甲基亞砜中，保持二甲基亞

5、砜的終濃度為5%，測(cè)定其對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)離體酚氧化酶活性的影響。結(jié)果表明，苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ均對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)離體酚氧化酶活性有明顯的抑制作用，抑制中濃度IC50分別為180.45μg/mL和1126.00μg/mL，苦瓜素Ⅰ的抑制作用明顯強(qiáng)于苦瓜素Ⅱ。4.苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ?qū)喼抻衩酌紫x(chóng)血淋巴蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
　　用含3mg/g的苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ的飼料飼喂亞洲玉米螟幼蟲(chóng)2d后，采用雙向電泳2-DE技術(shù)和MALDI-TOF/T

6、OF質(zhì)譜分析法對(duì)幼蟲(chóng)血漿蛋白進(jìn)行鑒定分析。結(jié)果表明，苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ均對(duì)亞洲玉米螟血漿蛋白表達(dá)有明顯的影響。經(jīng)苦瓜素Ⅰ和苦瓜素Ⅱ處理的亞洲玉米螟幼蟲(chóng)血漿蛋白質(zhì)圖譜上的蛋白質(zhì)點(diǎn)均明顯少于對(duì)照組，苦瓜素Ⅰ處理的亞洲玉米螟幼蟲(chóng)血漿蛋白點(diǎn)比對(duì)照減少了226個(gè)，苦瓜素Ⅱ處理的亞洲玉米螟幼蟲(chóng)血漿蛋白質(zhì)點(diǎn)比對(duì)照減少331個(gè)。比較苦瓜素Ⅰ處理組和對(duì)照組的蛋白點(diǎn)表達(dá)差異，蛋白質(zhì)含量差異倍數(shù)大于1.2倍的蛋白點(diǎn)有5個(gè)斑點(diǎn)，均為表達(dá)增加；其中，表達(dá)上調(diào)蛋白