左氧氟沙星脂質(zhì)體的肺靶向性研究.pdf

1、目的：肺部感染是人類的跨世紀疾病，嚴重地危害著人類健康，是我國的常見病、多發(fā)病。雖然抗生素的開發(fā)與研究，為防治感染性疾病提供了有利條件。但由于抗生素的濫用，細菌多藥耐藥性的產(chǎn)生，降低了治療肺部感染的效能，使治療的成功率大為降低。此外，抗生素本身對肺部較低的靶向性及對其他部位一些副作用，也給肺部感染的治療增加了難度。所以，研究和發(fā)展一種能夠增強抗生素在肺部抗菌活性的藥物傳遞系統(tǒng)是非常有必要的。 左氧氟沙星（Levofloxacin

2、，LVFX）是第三代喹諾酮類藥物，由于其抗菌譜廣，抗菌力強，目前已成為臨床治療感染性疾病的主要藥物。但是不良反應的發(fā)生、一些細菌對其產(chǎn)生的耐藥性及廣泛的分布性造成的在肺部位濃度低，在一定程度上也制約了其在臨床上的應用。近年來，通過新的制劑手段如脂質(zhì)體、納米粒增加抗生素的活性，提高肺部治療效能受到了廣大科研工作者的青睞。 脂質(zhì)體具有類似生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子層膜，與細胞膜組成相似，即與細胞膜的有高度親和性，通過和細胞膜發(fā)生融合作用，可

3、增強細胞攝取，實現(xiàn)細胞內(nèi)藥物傳輸，能夠提高生物利用度，抵抗細菌的抗藥性，經(jīng)靜脈注射后能夠?qū)崿F(xiàn)靶向和緩釋作用。通過控制脂質(zhì)體的粒徑可以實現(xiàn)被動靶向，粒徑大于5μm的脂質(zhì)體易被肺部的毛細血管截留，將藥物包裹于大粒徑的脂質(zhì)體中可以實現(xiàn)抗生素在肺部的蓄積，提高其在肺部的抗菌活性。脂質(zhì)體作為一種非常有前景的載體，在抗生素治療肺部感染方面一直受到了科研工作者的關(guān)注。 基于上述特點構(gòu)建了左氧氟沙星脂質(zhì)體的給藥系統(tǒng)，將左氧氟沙星包裹于大粒徑脂質(zhì)

4、體中，將其被動靶向到肺，使其在肺部更好的發(fā)揮治療效能，同時脂質(zhì)體的包裹可使藥物緩慢的釋放，延長其半衰期，同時也降低左氧氟沙星在一些非靶部位的分布，有利于降低其副作用。由于左氧氟沙星為兩親性弱堿性藥物，采用傳統(tǒng)的被動載藥法包封率低，而采用包封率高的硫酸銨梯度法來制備，又存在穩(wěn)定性差、室溫放置不穩(wěn)定等缺陷，在試驗中我們采用了硫酸銨梯度法制備了包封率高的脂質(zhì)體，并采用PEG2000對脂質(zhì)體進行包衣以期達到增加穩(wěn)定性的目的。 方法與結(jié)果

5、：采用紫外分光光度法測定左氧氟沙星的含量，輔料不干擾測定，專屬性強，方法簡便、靈敏，該法適合左氧氟沙星的測定。采用高速離心法對左氧氟沙星脂質(zhì)體及包衣脂質(zhì)體的包封率進行測定，可以將脂質(zhì)體與未包封藥物完全分離，回收率符合測定要求。 分別采用了薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、乙醇注入法及硫酸銨梯度法制備左氧氟沙星脂質(zhì)體，以包封率為評價指標，在單因素考察基礎(chǔ)上，采用正交試驗設(shè)計優(yōu)化脂質(zhì)體的處方組成和制備工藝；將優(yōu)化處方和工藝制備的脂質(zhì)體，用PE

6、G 2000包衣，考察PEG2000的加入方法及用量對穩(wěn)定性的影響。結(jié)果表明：硫酸銨梯度法制備的左氧氟沙星脂質(zhì)體包封率最高，優(yōu)化的最佳處方組成為：磷脂與膽固醇之比為（8：1，g/g），藥脂比為（1：8，g/g），硫酸銨的濃度為0.3mol/L；最佳制備工藝條件為：透析時間為18h，孵育溫度為50℃，孵育時間為20min；將1％PEG2000水溶液和左氧氟沙星溶液同時加入空白脂質(zhì)體中，50℃時孵育，穩(wěn)定性最好。 采用電子透射顯微鏡

7、觀察脂質(zhì)體的外觀形態(tài)；激光散射粒度分析儀測定脂質(zhì)體的粒徑及其粒度分布；電勢顯微電泳儀測定脂質(zhì)體表面Zeta電位；動態(tài)膜透析法測定脂質(zhì)體的體外釋藥特性，以零級動力學方程、一級動力學方程、Higuchi方程和Weibull方程等數(shù)學模型擬合脂質(zhì)體的體外釋藥動力學；冰箱4℃貯存，考察了兩種脂質(zhì)體的初步穩(wěn)定性。結(jié)果表明：兩種脂質(zhì)體外觀均呈橢圓形，大小均勻，未包衣左氧氟沙星脂質(zhì)體指紋狀結(jié)構(gòu)明顯，PEG包衣后的脂質(zhì)體指紋狀結(jié)構(gòu)不明顯，可能是PEG2

8、000的加入覆蓋了脂質(zhì)體的外層，掩飾了脂質(zhì)體的部分指紋；未包衣和包衣左氧氟沙星脂質(zhì)體的平均粒徑分別為（7.424±0.689）μm和（6.28±0.891）μm；Zeta電位分別為（+13.11±1.08）mV和（-12.88±0.81）mV。兩種脂質(zhì)體的pH均在5.5-6.0之間，符合注射劑的要求；體外釋放與藥物溶液相比均表現(xiàn)了明顯的緩釋作用，均符合Weibull方程，其中PEG2000包衣脂質(zhì)體的緩釋作用更明顯。初步穩(wěn)定性試驗結(jié)果表

9、明，PEG2000脂質(zhì)體的包衣對左氧氟沙星脂質(zhì)體起到了明顯的穩(wěn)定作用。 采用HPLC法測定家兔血漿、小鼠血漿及組織中的左氧氟沙星的濃度，并進行了方法學考察。以左氧氟沙星注射液為對照，對左氧氟沙星脂質(zhì)體及PEG包衣左氧氟沙星脂質(zhì)體進行了藥動學與組織分布動力學的研究；以相對攝取率（Re）、相對靶向效率（Te）、峰面積之比（Ce）等靶向性參數(shù)為指標，對脂質(zhì)體的靶向性進行了評價。結(jié)果表明，在所選色譜條件下，內(nèi)源性物質(zhì)不干擾左氧氟沙星的測

10、定，家兔血漿平均提取回收率大于90％，方法回收率在95％～105％之間，日內(nèi)、日間精密度RSD小于4％，標準曲線方程A=40761 C+24093（r＝0.9989），血藥濃度在0.1～50μg /ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；小鼠各組織器官平均提取回收率均大于90％，方法回收率在95％～105％之間，日內(nèi)、日間精密度均小于4％，小鼠血漿、各組織線性范圍為0.1～50μg/ml，線性關(guān)系良好，上述試驗結(jié)果均滿足生物樣品測定要求。與注射液相比，

11、兩種脂質(zhì)體家兔體內(nèi)的藥動學發(fā)生了明顯變化，平均滯留時間（MRT）、消除半衰期（t1/2β，p<0.05）、表觀分布容積（V）均有所增加；PEG2000包衣脂質(zhì)體t1/2β較未包衣脂質(zhì)體延長。靶向性評價結(jié)果表明，將左氧氟沙星制成脂質(zhì)體后，肺靶向性大大提高，相反降低了心、腎中的藥物濃度。PEG2000包衣脂質(zhì)體與未包衣脂質(zhì)體的體內(nèi)分布沒有顯著性差異。 結(jié)論：本課題成功研制了具有肺靶向性的左氧氟沙星脂質(zhì)體，所采用的制備工藝簡便可行，重

12、現(xiàn)性好，包封率較高，經(jīng)PEG2000包衣后體外穩(wěn)定性良好。將左氧氟沙星制備成脂質(zhì)體后，明顯改變了藥物的體內(nèi)配置，與注射劑相比，脂質(zhì)體制劑使藥物蓄積于肺部，增加了肺部的局部藥物濃度，緩慢平穩(wěn)釋放藥物，維持炎癥部位長時間的有效藥物濃度，并且可以減少非靶部位如心、腎、腦的蓄積，有效提高作用部位的藥物濃度，降低非把部位的藥物濃度，從而可提高療效，降低副作用，減少用藥次數(shù)，延長藥物在作用部位時間，減輕病人痛苦，提高病人用藥的順應性和用藥水平，具有