甲狀腺乳頭狀癌的核外分子遺傳和表觀遺傳學(xué)研究.pdf

1、目的：(1)檢測甲狀腺乳頭狀癌組織中線粒體DNA(mtDNA)D環(huán)區(qū)的突變情況，探討其是否為突變熱點(diǎn)。(2)檢測甲狀腺乳頭狀癌組織中mtDNA含量(拷貝數(shù))變化，分析其與臨床病理的關(guān)系。(3)檢測甲狀腺乳頭狀癌組織中腫瘤抑制基因RASSFlA、p16<'INK4a>和ATM啟動子區(qū)異常甲基化，探討其與臨床病理的關(guān)系。 方法：(1)采用自身對照研究，對35例甲狀腺乳頭狀癌患者的癌組織和外周血淋巴細(xì)胞抽提mtDNA，再行PCR擴(kuò)增和

2、直接測序方法對mtDNA D環(huán)的兩個(gè)高變區(qū)(HVR-I和HVR-II)進(jìn)行突變檢測。(2)應(yīng)用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測29例甲狀腺乳頭狀癌、14例甲狀腺腺瘤和11例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及其配對正常甲狀腺組織的mtDNA含量變化。(3)應(yīng)用甲基化特異性PCR方法檢測52例甲狀腺乳頭狀癌、14例甲狀腺腺瘤和ll例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及其配對正常甲狀腺組織中RASSFlA、p16<'INK4a>和ATM基因啟動子區(qū)的異常甲基化。 結(jié)

3、果：(1)在35例甲狀腺乳頭狀癌患者中有2例發(fā)現(xiàn)突變，突變率為5.7％。突變位點(diǎn)5個(gè)，都在HVR-II區(qū)，均為同質(zhì)性突變，其中2個(gè)屬于微衛(wèi)星不穩(wěn)定，其余3個(gè)屬于堿基置換突變。研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)2個(gè)尚未報(bào)道的多態(tài)位點(diǎn)(nt324：C→G；nt16092：T→A)。(2)29例甲狀腺乳頭狀癌中mtDNA相對含量為224.13±217.24；配對癌旁正常組織mtDNA相對含量為88.694±44.06，明顯高于癌旁正常組織(P<0.01)。25例甲

4、狀腺良性病變中mtDNA相對含量為129.48±105.27；配對瘤旁正常組織mtDNA相對含量為89.444±29.75，甲狀腺良性病變mtDNA含量與瘤旁正常甲狀腺組織無顯著差異，但低于甲狀腺乳頭狀癌組(P<0.05)。甲狀腺良性病變中，甲狀腺腺瘤和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫的mtDNA含量差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。甲狀腺乳頭狀癌的mtDNA含量變化與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等主要臨床病理參數(shù)未見相關(guān)性(P>0.05)。(3)RASSFlA基因啟

5、動子區(qū)在甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁組織中的甲基化率分別為65.4％和42.3％，癌組織中的甲基化率不僅高于癌旁正常組織，也高于甲狀腺良性病變(P<0.05)； P16<'INK4a>基因啟動子區(qū)在甲狀腺乳頭狀癌組織和癌旁組織中的甲基化率分別為42.3％和15.4％，癌組織中的甲基化率不僅高于癌旁正常組織，也高于甲狀腺良性病變(P<0.01)。而所有的甲狀腺腫瘤組織中均未檢出ATM基因啟動子甲基化。其中RASSFlA基因甲基化與甲狀

6、腺乳頭狀癌的主要臨床病理參數(shù)均未見相關(guān)性，而P16<'INK4a>基因甲基化在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)。此外，在甲狀腺乳頭狀癌組織中RASSFlA和P16<'INK4a>基因甲基化之間并無協(xié)同作用。 結(jié)論： 1．甲狀腺乳頭狀癌在mtDNA D環(huán)的兩個(gè)高變區(qū)(HVR-I和HVR-Ⅱ)的突變率僅為5.7％，突變率較其它上皮來源腫瘤明顯為低，D環(huán)的這兩個(gè)高變區(qū)并不是甲狀腺乳頭狀癌的突變熱點(diǎn)。 2

7、．在甲狀腺乳頭狀癌組織中mtDNA的相對含量顯著高于配對癌旁正常組織，也高于甲狀腺良性病變，提示mtDNA含量增高可能與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生有關(guān)，推測是對細(xì)胞氧化磷酸化功能受損的一種代償效應(yīng)。 3．甲狀腺良性病變時(shí)mtDNA含量已有增加趨勢，并且在甲狀腺乳頭狀癌組織中mtDNA含量增加與患者的浸潤、轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)無關(guān)，提示這種變化可能發(fā)生在甲狀腺乳頭狀癌的早期階段。 4．甲狀腺乳頭狀癌組織中存在著高頻率的RASSFl