轉(zhuǎn)染VEGF基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植改善心肌梗死后心臟重構(gòu).pdf

1、 本研究觀察構(gòu)建的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子基因腺病毒轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后的表達(dá)，觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子基因轉(zhuǎn)染的誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞植入梗死心肌后對心臟重構(gòu)的影響，為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染基因治療缺血性心臟病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 筆者實(shí)驗(yàn)室成功構(gòu)建了hVEGF165腺病毒表達(dá)載體。利用包裝細(xì)胞HEK293擴(kuò)增hVEGF165腺病毒；用PCR法鑒定擴(kuò)增的腺病毒；用終點(diǎn)稀釋分析方法測定擴(kuò)增后腺病毒滴度。用密度梯度離心法分離大鼠骨髓間充質(zhì)干

2、細(xì)胞，體外培養(yǎng)、5-氮胞苷誘導(dǎo)，用相差顯微鏡、電子顯微鏡、免疫細(xì)胞化學(xué)方法和流式細(xì)胞儀等對誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 結(jié)論為構(gòu)建的hVEGF165腺病毒可在體外高效擴(kuò)增；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可在體外誘導(dǎo)分化為肌源性細(xì)胞；轉(zhuǎn)染hVEGF165腺病毒的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外生長良好，高效表達(dá)VEGF；轉(zhuǎn)染hVEGF165腺病毒的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在心肌內(nèi)存活，并分化為肌源性細(xì)胞，梗死區(qū)新生血管形成增加，心臟膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶合成降低，心臟重構(gòu)減輕，