兔耳病理性瘢痕經(jīng)瘢痕皮回植術后組織中MMP-1、TIMP-1表達變化的研究.pdf

1、背景：瘢痕(scar)的形成是組織損傷修復的正常過程，適度的瘢痕形成是一種生理性和自衛(wèi)性的表現(xiàn)，然而過度增生則屬于病理性改變。病理性瘢痕(abnormalscar)臨床表現(xiàn)為局部組織增生、增厚、痛癢不適、活動受限，是整形外科，甚至是整個醫(yī)學界工作和研究難點和熱點之一。病理性瘢痕的發(fā)生機制至今尚未清楚，因此在治療上難以取得突破。雖然目前臨床上治療病理性瘢痕的方法很多，但是尚沒有一種理想的治療方法。其中瘢痕皮回植能避免或減少自體皮膚的移植而

2、達到治療的目的。但治療機制尚未完全清楚，缺乏相關的基礎研究。
　　 瘢痕形成與基質金屬蛋白酶（matrixmetalloproteinases，MMPs）因素有關。MMPs是膠原降解的關鍵酶，能降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原；其表達和活性受到多種因素的調控。MMPs的調控以特異性的酶抑制劑(Tissueinhibitorofmetalloproteinases，TIMPs)最為重要，二者的平衡在機體內對穩(wěn)定細胞外基質起著關鍵的作用。

3、>　　 目的：本研究應用兔耳模型觀察基質金屬蛋白酶-1(MMP-1)、TIMP-1在病理性瘢痕經(jīng)瘢痕皮回植術后組織中表達的變化，探討瘢痕皮回植治療病理性瘢痕的機制，從而為此種方法提供可能的理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.兔耳增生性瘢痕動物模型的制備：
　　 健康新西蘭兔，雌雄不限（不包括孕兔），清潔級，體重2±0.2kg。在兔耳腹側面切除皮膚及軟骨膜保留軟骨，形成1×2cm的創(chuàng)面，上中下各一個，內外側各一列

4、，共120個創(chuàng)面。
　　 2實驗分組：
　　 A組（正常對照組）：即造模前切除之皮膚；
　　 B組（增生瘢痕組）：30天形成增生性瘢痕時取同側耳廓一列增生性瘢痕組織；
　　 C組（瘢痕皮回植術組）：將同側耳廓另外一列瘢痕塊做瘢痕皮回植術，在術后28天的瘢痕組織。
　　 3觀察指標：
　　 切除之兔耳皮膚及瘢痕組織，10％中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟制片。行HE染色和MASSON特殊組織化學染

5、色觀察模型建立的情況；行免疫組織化學染色方法觀察各組皮膚MMP-1、TIMP-1的表達情況。
　　 4統(tǒng)計學方法：采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。結果：
　　 1模型的建立
　　 創(chuàng)面處理30天后，觀察增生性瘢痕形成情況。發(fā)現(xiàn)120個創(chuàng)面中有70個創(chuàng)面形成增生性瘢痕。兔耳瘢痕呈淡紅或暗紅色，質地較硬韌，局部隆起高于周圍正常皮膚，厚度＞0.5cm，且瘢痕向中心區(qū)呈現(xiàn)攣縮趨勢，兔耳不平展，耳緣卷曲。

6、　　 創(chuàng)面處理30天增生性瘢痕形成率為58.33％。沿原切口切開皮膚，完整切取同側耳廓一列增生性瘢痕組織共35例瘢痕，即為實驗B組觀察例數(shù)。
　　 在取材增生性瘢痕時，完整切取余35例增生性瘢痕組織，行經(jīng)瘢痕皮回植術。術后28天觀察，回植處瘢痕組織共形成30例，即為實驗C組觀察例數(shù)?；刂残g瘢痕造模成功率為85.71％。經(jīng)瘢痕皮回植術后該區(qū)域皮膚較回植前顏色轉淡，瘢痕未再增生、增厚，質地變軟。
　　 2HE染色結果觀察：

7、
　　 正常對照A組：鱗狀上皮薄，基底細胞層排列整齊，基底膜平坦，表面可見角化。皮下含有紅染的纖維及平滑肌樣組織，可見皮脂腺。
　　 實驗B組：鱗狀上皮較正常對照A組明顯增厚，基底細胞層增生，基底膜欠平滑。上皮表面可見角化，皮下為成片紅染的纖維樣組織-即為瘢痕組織，瘢痕組織內含少量炎細胞和血管成分。
　　 實驗C組：鱗狀上皮仍較厚，基底細胞層增生，基底膜欠平滑。上皮表面可見角化，皮下成片紅染的纖維樣組織內，可見多

8、量紅細胞、炎細胞、血管和毛細血管。
　　 3MASSON染色結果觀察：
　　 正常對照A組；鱗狀上皮下，可見染色呈紅色的平滑肌組織占有很大比例；在紅色的平滑肌組織間，間有少量染成綠色的纖維組織。
　　 實驗B組：鱗狀上皮下，幾乎見不到染色呈紅色的平滑肌組織；與正常對照A組相反，占有很大比例的是染成綠色的纖維組織。
　　 實驗C組：鱗狀上皮下，占有很大比例的仍是染成綠色的纖維組織內，在纖維組織內可見較多炎細

9、胞、血管及毛細血管。
　　 4免疫組織化學染色4.1MMP-1的免疫組織化學染色結果A組：MMP-1在A組為陰性表達，半定量分析值1.70±0.48。
　　 B組：MMP-1表達在表面鱗狀上皮細胞和瘢痕組織中，半定量分析值為4.57±0.50。統(tǒng)計分析顯示，MMP-1的表達較正常對照A組明顯升高(P＜0.01)C組：在形成的瘢痕組織和表面鱗狀上皮和瘢痕中MMP-1表達，在上皮內中表層細胞表達明顯增強，半定量分析值為5.3

10、3±0.61。統(tǒng)計分析表明，C組MMP-1的表達較正常對照A組明顯升高(P＜0.01)，且較B組表達增強(P＜0.01)。
　　 4.2TIMP-1的免疫組織化學染色結果A組TIMP-1在A組為陰性表達，半定量分析值1.90±0.32。
　　 B組：瘢痕組織和表面鱗狀上皮可見TIMP-1表達，在上皮內中底層細胞表達明顯增強，半定量分析值為5.06±0.59。統(tǒng)計分析顯示，B組TIMP-1的表達較正常對照A組明顯升高(P＜

11、0.01)。
　　 C組：在形成的瘢痕組織和表面鱗狀上皮和瘢痕中TIMP-1表達，在上皮內以中層細胞表達明顯，半定量分析值為4.23±0.43。統(tǒng)計分析表明，C組TIMP-1的表達較正常對照A組明顯升高(P＜0.01)，且較B組表達減弱(P＜0.01)。
　　 結論：經(jīng)兔耳可成功制成增生性瘢痕和瘢痕皮回植術模型；瘢痰皮回植術瘢痕治療的機制與瘢痕組織內MMP-1和TIMP-1表達增強有關：MMP-1表達增強較TIMP-1明