老年期輕度認(rèn)知功能障礙大鼠模型的建立及葉酸改善其學(xué)習(xí)記憶的實(shí)驗研究.pdf

1、目的：輕度認(rèn)知功能障礙(mildcognitiveimpairment,MCI)指介于正常老化和癡呆之間的一種臨床狀態(tài),處于這種狀態(tài)的個體存在超出其文化所允許范圍的記憶障礙,但其他功能完好,達(dá)不到癡呆的診斷標(biāo)準(zhǔn)。每年約有10％-15%的MCI患者發(fā)展成為阿爾茲海默病(Alzheimer’sdisease,AD),因此MCI人群將成為癡呆的高危人群。由于AD的進(jìn)展不可逆性及治療效果不佳,對老年癡呆的研究重點(diǎn)已轉(zhuǎn)向早期預(yù)防和積極治療MCI上

2、。本研究主要探討老年期MCI大鼠模型的制備方法,研究老年期大鼠MCI的病理生理特點(diǎn),并進(jìn)一步探討葉酸改善其學(xué)習(xí)和記憶能力的可能機(jī)制。
　　本研究共分成兩個部分:
　　一、老年期輕度認(rèn)知功能障礙大鼠模型的建立
　　方法：健康14-18月齡SD雄性大鼠40只,隨機(jī)分為模型組(n=20)和假手術(shù)組(n=20),模型組造成雙側(cè)頸總動脈(commoncarotidartery,CCA)重度狹窄,假手術(shù)組只分離雙側(cè)頸總動脈但不結(jié)扎

3、。造模后30天從Morris水迷宮實(shí)驗、腦組織的病理形態(tài)學(xué)及電鏡觀察、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(Reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)檢測海馬組織中G蛋白偶聯(lián)受體激酶2(Gprotein-coupledreceptorkinase2,GRK2)mRNA表達(dá)、蛋白免疫印跡法(Westernblot)檢測海馬組織GRK2蛋白表達(dá)等方面評價模型組和假手術(shù)組大鼠。
　　結(jié)果：(

4、1)模型組大鼠的死亡率為10%,死亡率較低。(2)病理形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)結(jié)果顯示,假手術(shù)組大鼠海馬組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)較正常,而模型組大鼠海馬CA1區(qū)椎體細(xì)胞缺血脫失,排列較疏松,部分細(xì)胞出現(xiàn)胞核固縮、深染,腦白質(zhì)未見明顯梗死灶,部分白質(zhì)纖維變稀疏且走行較紊亂變,出現(xiàn)核仁變小靠邊,胞漿電子密度增高,偶見脂褐素,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及高爾基體擴(kuò)張,胞漿游離核糖體增多,線粒體腫脹,部分出現(xiàn)空泡變。(3)Morris水迷宮測試結(jié)果顯示,定位航行實(shí)驗結(jié)果顯示模型組

5、大鼠平均逃避潛伏期均較假手術(shù)組大鼠延長(P<0.05),空間探索實(shí)驗結(jié)果顯示模型組大鼠第1次穿越原平臺所在位置的平均時間為(36.80±7.68)s,明顯長于假手術(shù)組的平均時間(20.87±6.16)s;模型組大鼠60秒平均穿越原平臺次數(shù)為(1.43±0.51)次,顯著少于假手術(shù)組的(3.10±1.45)次,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(4)海馬組織中GRK2mRNA和GRK2蛋白相對表達(dá)量結(jié)果顯示,模型組海馬組織中GRK2m

6、RNA和GRK2蛋白相對表達(dá)量均較假手術(shù)組明顯增強(qiáng)(P<0.05)。
　　結(jié)論：(1)老年期CCA重度狹窄大鼠模型的穩(wěn)定性和可重復(fù)性較好。(2)與假手術(shù)組相比,模型組大鼠細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)均出現(xiàn)輕度病理學(xué)改變,且認(rèn)知功能有輕度損害,可以作為MCI動物模型。(3)本研究提示GRK2可能在MCI發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用。
　　二、葉酸改善老年期輕度認(rèn)知功能障礙大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力的可能機(jī)制
　　方法：健康14-18月齡S

7、D雄性大鼠40只,隨機(jī)分為假手術(shù)對照組(SC)、模型對照組(MC)、低劑量給藥組(LD)和高劑量給藥組(HD),每組10只。利用鼠頸總動脈重度狹窄阻斷法制備老年期MCI大鼠模型,造模30天后行Morris水迷宮實(shí)驗剔除出不符合MCI標(biāo)準(zhǔn)的大鼠。每日LD組用4mg·kg-1·d-1,HD組用12mg·kg-1·d-1葉酸灌胃,SC組及MC組均給予相同劑量生理鹽水灌胃。連續(xù)灌胃30天后再次行Morris水迷宮實(shí)驗檢測大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力,然

8、后取血漿及新鮮海馬組織,采用化學(xué)免疫發(fā)光法測定血清葉酸濃度,采用循環(huán)液相法測定血漿同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)濃度;利用RT-PCR及Westernblot法檢測海馬組織GRK2mRNA及蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：(1)Morris水迷宮行為學(xué)檢測,定位航行實(shí)驗中HD、LD組的搜索平臺平均潛伏期均低于MC組(P<0.05),HD組低于LD組(P<0.05),SC最低(P<0.05)?？臻g探索試驗中,HD、LD組的

9、穿越原平臺次數(shù)和跨越目標(biāo)象限時間占整個游泳時間的百分比明顯高于MC(P<0.05),HD組高于LD組(P<0.05),SC最高(P<0.05)。(2)血清葉酸濃度檢測,HD、LD組血清葉酸濃度均明顯高于MC組(P<0.05),HD組血清葉酸濃度高于LD組(P<0.05)。(3)血漿Hcy濃度檢測,HD、LD組血漿Hcy濃度均明顯低于MC組(P<0.05),HD組血漿Hcy濃度低于LD組(P<0.05)。(4)海馬組織中GRK2mRNA和