河南省豬、羊畢氏微孢子蟲病分子流行病學(xué)調(diào)查及遺傳特征初步研究.pdf

1、微孢子蟲是一類廣泛分布于自然界專性細(xì)胞內(nèi)寄生的真核原生動(dòng)物，能感染多種宿主，包括無脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物，是一類人獸共患性疾病病原。它包括1400多種，分別被劃入150多個(gè)屬，其中至少8個(gè)屬14種微孢子蟲能感染人。20世紀(jì)80年代以來，隨著 AIDS廣泛流行，微孢子蟲被認(rèn)為是一種重要的條件性致病菌。微孢子蟲可以感染免疫功能缺陷者和免疫功能正常者，免疫力正常的人和動(dòng)物感染微孢子蟲后表現(xiàn)為一過性癥狀，或呈隱性感染；免疫力低下的病人、免疫功能抑制

2、者、免疫缺陷患者尤其是AIDS患者感染后會(huì)引起致死性腹瀉，是艾滋病患者的主要致死因素之一。此外，微孢子蟲還可引起角膜炎，腦炎，心肌炎、泌尿系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等疾病。微孢子蟲病作為一種新發(fā)傳染病已引起世界范圍的公共衛(wèi)生問題，被美國(guó)國(guó)立過敏和傳染性疾病研究院列入第二類具有潛在危險(xiǎn)的微生物名單。為了解我省部分地區(qū)豬、羊畢氏微孢子蟲病的流行情況，為微孢子蟲病的防治及今后的研究提供參考依據(jù)，對(duì)我省部分地區(qū)的豬、羊群進(jìn)行了畢氏微孢子蟲感染情況調(diào)查及分子

3、特征的初步研究。
　　1、為了解我省部分地區(qū)豬腸道寄生蟲病的感染及危害情況，科學(xué)地制定防治計(jì)劃，合理指導(dǎo)動(dòng)物腸道寄生蟲病的防治工作，于2013年5月—2013年9月對(duì)河南省7個(gè)地區(qū)(鄭州金水區(qū)、輝縣、原陽、漯河召陵區(qū)、西華、信陽羅山縣、中牟)及四川北川等地采集462份樣品，應(yīng)用盧戈氏碘液染色法、飽和蔗糖溶液漂浮法和麥克馬斯計(jì)數(shù)法等方法對(duì)所有樣品進(jìn)行檢查，結(jié)果285份樣品查到不同種寄生蟲感染，總感染率為61.93％；共查到球蟲、隱孢

4、子蟲、賈第蟲、鞭蟲、圓線蟲、蛔蟲、結(jié)腸小袋纖毛蟲、阿米巴等8種(類)腸道寄生蟲，其中阿米巴感染率最高，為44.81%；且球蟲感染強(qiáng)度在<200-4600,圓線蟲的感染強(qiáng)度在<200-600。
　　2、為了解河南省部分地區(qū)豬畢氏微孢子蟲的感染情況及分子特征，用巢氏PCR技術(shù)對(duì)462份糞便樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果檢出120份陽性樣品，感染率為25.97%，基因片段長(zhǎng)392bp。不同年齡的豬及不同飼養(yǎng)方式飼喂的豬，微孢子蟲感染率都存在差異，不

5、同年齡階段的感染率順序?yàn)椋河守i(24.07%)、母豬(21.13%)、保育豬(18.52%)、乳豬(12.90%)、公豬(8.33%)；小專業(yè)戶感染率(42.15%)高于散養(yǎng)(16.08%)高于規(guī)?；?3.13%)。河南省中牟畢氏微孢子蟲的感染率最高56.41%。將陽性樣品測(cè)序、BLAST比對(duì)后，得到6個(gè)序列，在Genbank下載得到的6個(gè)序列，應(yīng)用Clustal X1.81、Phyloip3.64、DNAstar4.0等生物信息學(xué)軟

6、件對(duì)12個(gè)序列進(jìn)行比對(duì)、同源性分析及構(gòu)建分子發(fā)育進(jìn)化樹，最后顯示結(jié)果，豬感染五個(gè)基因型的畢氏微孢子蟲，分別為：F(26.47%)、PigEBITS5(2.94%)、EbpD(2.94%)、Type IV(2.94%)、EbpC(E、Peru4、WL13)(61.76%)，其中、EbpC、Type IV基因型也在人類中發(fā)現(xiàn)，有人畜共患的潛在風(fēng)險(xiǎn)，還有一個(gè)新的基因型，它與人源性基因型Typeⅳ關(guān)系最近，有一個(gè)堿基的差異，同源性為99.7%。

7、
　　3、為了解河南省部分地區(qū)羊畢氏微孢子蟲的感染情況及分子特征，用巢氏PCR技術(shù)對(duì)802份糞便樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果檢出74份陽性樣品，感染率為9.23%，基因片段長(zhǎng)392bp。不同飼養(yǎng)方式、不同品種、年齡的羊及不同季節(jié)的羊，微孢子蟲感染率存在差異，綿羊感染率(6.93%)低于山羊(12.35%)；幼齡羊感染率(10.34%)高于成年羊(7.62%)；7-9月羊感染率(12.84%)高于10-12月羊(4.92%)；放牧羊感染率(1

8、3.99%)高于舍飼羊(6.59%)。將陽性樣品測(cè)序、BLAST比對(duì)后，得到6個(gè)序列，在Genbank下載得到的6個(gè)序列，應(yīng)用Clustal X1.81、Phyloip3.64、DNAstar4.0等生物信息學(xué)軟件對(duì)12個(gè)序列進(jìn)行比對(duì)、同源性分析及構(gòu)建分子發(fā)育進(jìn)化樹，最后顯示結(jié)果，羊感染五個(gè)基因型的畢氏微孢子蟲分別為：BEB6(83.8%)、EbpC/E/Peru4/WL13(9.46%)、D(2.70%)、其中EbpC、D基因型也在人