表面活性劑對(duì)聚乳酸納米粒的修飾及其CdSe量子點(diǎn)的標(biāo)記研究.pdf

1、聚乳酸納米載藥系統(tǒng)的生物相容性好、可控性強(qiáng)及穩(wěn)定性高，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域。表面活性劑在納米載藥系統(tǒng)的制備過程中起到藥物的增溶和穩(wěn)定化的作用。表面活性劑還影響納米載藥系統(tǒng)在體內(nèi)的分布和釋放。因此系統(tǒng)研究不同表面活性劑對(duì)聚乳酸納米粒（PLA-NPs）的作用具有重要的意義。本文制備不同表面活性劑修飾的PLA-NPs，通過模型藥物5-氨基熒光素（5-AF）的使用，探討表面活性劑對(duì)PLA-NPs的體外穩(wěn)定性、釋藥和體內(nèi)分布的影響。并將該體系用于C

2、dSe量子點(diǎn)（CdSe-QDs）的表面修飾，以提高CdSe-QDs的水溶性和生物相容性，使其能用于生物體內(nèi)的熒光成像。完成的主要研究工作有： （1）采用自乳化溶劑擴(kuò)散法制備了不同表面活性劑修飾的PLA-NPs。結(jié)果表明泊羅沙姆188 （poloxamer 188）修飾的PLA-NPs，其粒徑隨著PLA載體濃度的增加而變大。表面活性劑的親水性越高，粒徑越小，表面電荷越高，穩(wěn)定性越大。說明表面活性劑的親水性和所帶電荷是影響納米粒粒徑

3、和穩(wěn)定性的主要原因。 （2）研究不同溶劑、pH值、表面活性劑溶液及PLA納米載藥系統(tǒng)對(duì)5-AF的熒光光譜的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)極性不同的溶劑和pH值對(duì)5-AF的熒光光譜及其熒光強(qiáng)度均有不同程度的影響，量子產(chǎn)率測(cè)定結(jié)果表明5-AF具有較高的量子產(chǎn)率，可用于熒光分析。PLA-NPs包裹的5-AF與游離的相比，激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的大小及強(qiáng)度均有所增加。 （3）采用5-AF作為模型藥物，研究poloxamer 188、十六烷基三甲基溴

4、化胺（CTAB）、十二烷基三甲基磺酸鈉（SDS）和牛血清白蛋白（BSA）修飾對(duì)PLA-NPs體外藥物釋放規(guī)律的影響。結(jié)果表明四種表面活性劑修飾的PLA-NPs的粒徑和表面電荷均不同。BSA具有良好的親水性，其粒徑最小，CTAB親水性最低，粒徑最大。四種PLA-NPs的載藥量都很低，而包封率都比較高。體外藥物釋放的研究結(jié)果表明，poloxamer 188、BSA和SDS具有相似的體外藥物釋放規(guī)律，其體外藥物釋放表現(xiàn)出突釋效應(yīng)。在突釋階段，

5、NPs釋藥量在短時(shí)間內(nèi)大量增加（4h， >78％）。而CTAB的釋放量呈線性增長(zhǎng)，最終釋放量約為65％。 （4）CTAB因?yàn)槠浼?xì)胞毒性無法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其它三種表面活性劑修飾PLA-NPs的體內(nèi)分布研究結(jié)果表明，所有被PLA-NPs修飾后的5-AF都比未經(jīng)修飾的具有更長(zhǎng)的血液循環(huán)時(shí)間。BSA修飾的PLA-NPs具有顯著的長(zhǎng)循環(huán)特性。由于藥物或載體對(duì)不同的臟器有不同的吸附能力，使得各個(gè)臟器的藥物分布出現(xiàn)完全不同的規(guī)律。與游離藥物相比，

6、納米載藥系統(tǒng)表現(xiàn)出不同程度的肝靶向。其中，SDS和BSA修飾的PLA-NPs的肝靶向作用尤其明顯，并且BSA修飾的PLA-NPs在肝中的聚集量始終保持在15％左右，可用于肝靶向和緩釋藥物的載體修飾。 （5）采用納米沉淀法將CdSe-QDs包裹在PLA-NPs中，再用poloxamer188對(duì)該NPs進(jìn)行表面修飾（CdSe-QDs-PLA-NPs）。CdSe-QDs-PLA-NPs具有較好的粒徑分布和穩(wěn)定性。透射電鏡下觀察CdSe

7、-QDs-PLA-NPs的形貌大部分均成球形，且無團(tuán)聚或黏附現(xiàn)象。CdSe-QDs-PLA-NPs的發(fā)射波長(zhǎng)在565nm，與未作任何表面修飾的CdSe-QDs相比有一定的紅移現(xiàn)象。熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)CdSe-QDs-PLA-NPs的熒光可以在水溶液中穩(wěn)定存在超過30天。體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)顯示不同時(shí)間不同臟器的修飾后的QDs的分布均不同。以上結(jié)果表明經(jīng)表面修飾后的CdSe-QDs-PLA-NPs作為生物體系的熒光成像研究具有很大的潛力。

8、 （6）采用納米沉淀法制備帶不同電荷的表面活性劑修飾的CdSe-QDs-PLA-NPs。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同的表面活性劑修飾的CdSe-QDs-PLA-NPs具有不同的粒徑、粒徑分布和表面電荷。體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)poloxamer188修飾的CdSe-QDs-PLA-NPs對(duì)肝癌細(xì)胞的增值率顯示出輕微的抑制；SDS修飾的CdSe-QDs-PLA-NPs在10~50 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)不會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性；CTAB修飾的CdSe-Q