巨型艾美耳球蟲保定株的分離鑒定及免疫原性研究.pdf

1、巨型艾美耳球蟲(Eimeria maxima)是集約化養(yǎng)雞場最常見的3種球蟲之一，主要感染3月齡以內(nèi)的雛雞，分布較廣，致病力中等。小劑量感染時不會引起嚴(yán)重死亡，但造成飼料轉(zhuǎn)化率低，降低雛雞體增重，引起巨大的經(jīng)濟損失。鑒于該球蟲對養(yǎng)雞業(yè)的重要危害，國內(nèi)外學(xué)者對其進行了大量研究。本試驗通過分離獲得該球蟲純種卵囊建立純種傳代系，對其進行一般生物學(xué)特性、致病性、免疫原性以及分子生物學(xué)等方面的研究，為巨型艾美耳球蟲的深入研究奠定基礎(chǔ)。
　　

2、本研究采用單卵囊分離技術(shù)，從保定市某雞場球蟲混合感染的雛雞糞便中，分離出疑似巨型艾美耳球蟲。分離的球蟲進行形態(tài)學(xué)和生活史觀察，其寄生于小腸中段、卵囊為卵圓形、卵較大、卵囊壁金黃色。測100個卵囊的大小為(32.0-40.8)×(20.8-31.2)um，平均大小為36.4um×26.0um，卵囊形態(tài)指數(shù)為1.4。卵囊窄端有一折光性強的極體，無內(nèi)外殘體。最短孢子化時間為26h，完全孢子化時間為28h，潛隱期128h。鑒定為巨型艾美耳球蟲，

3、命名為巨型艾美耳球蟲保定株。
　　分別用1×104、2×104、5×104、10×104個/只孢子化卵囊的劑量感染四組海蘭灰公雛，對其致病性進行研究，第一組為健康對照組。以臨床癥狀、體重、死亡率、觀察糞便計分、卵囊排出量為判定指標(biāo)，對保定株E.maxima的致病性進行研究。感染雞出現(xiàn)驚群、采食量下降、腸粘膜出血、排血便等臨床癥狀。感染雞的卵囊排出總量分別為:3.24×106個/g、3.97×106個/g、7.10×106個/g、1

4、7.04×106個/g;相對增重率分別為:81.41％、62.32％、45.27％、28.42％;糞便觀察記分別為:1分、1分、2分、3分;死亡率分別為:0％、6.67％、13.33％、23.33％。
　　對巨型艾美耳球蟲保定株進行分子學(xué)鑒定，經(jīng)純化、提取基因組DNA后，用已報道的種特異引物做PCR擴增，在151bp處擴增出了清晰的目的條帶，將擴增產(chǎn)物進行膠回收、測序。與Genbank中的11株巨型艾美耳球蟲相關(guān)序列進行同源性比對

5、。從而確定本試驗分離蟲株為巨型艾美耳球蟲。系統(tǒng)進化樹分析發(fā)現(xiàn)保定株與JN113578.1(YZ株)存在較近的親緣關(guān)系，表明巨型艾美耳球蟲的親緣關(guān)系與地理分布沒有直接關(guān)系。
　　本試驗用巨型艾美耳球蟲保定株和黃芪多糖注射液免疫增效劑免疫雛雞，將7日齡雛雞隨機分為5組，即健康對照組、黃芪多糖注射液免疫增效組、人工感染免疫組、黃芪多糖注射液+巨型艾美耳球蟲保定株人工感染免疫組和攻蟲不免疫組每組30只。7日齡免疫一次，人工感染免疫組用1×

6、103個卵囊，黃芪多糖注射液免疫增效組0.1ml/只，黃芪多糖注射液+巨型艾美耳球蟲保定株人工感染免疫組為(0.1ml+1×103個)/只。14日齡加強免疫一次，人工感染免疫組用3×103個卵囊，黃芪多糖注射液免疫增效組0.1ml/只，黃芪多糖注射液+巨型艾美耳球蟲保定株人工感染免疫組為（0.1m1+3×103個）/只。雛雞21日齡用5.0×104個巨型艾美耳球蟲保定株球蟲孢子化卵囊進行攻毒試驗，檢測雛雞血液T淋巴細(xì)胞增殖能力，測定血清