1,25(OH)2D3抑制肝癌細(xì)胞HDAC2活性及促進(jìn)p21WAFI-CIP1表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　本課題通過研究1,25(OH)2D3對(duì)肝癌細(xì)胞中組蛋白去乙?；?（HDAC2）的抑制作用和細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)情況，探討1,25(OH)2D3是否通過抑制HDAC2表達(dá)來促進(jìn)了p21 WAFI／CIP1高表達(dá)，致使人肝癌細(xì)胞株停滯于GO/GI期，從而調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的增殖和分化。
　　方法：
　　本課題首先培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株（HpG2）,用CCK-8試劑盒檢測(cè)1,25(OH)2D3對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用，得出1,2

2、5（OH）2D3對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制率的趨勢(shì)；在不同時(shí)間點(diǎn)和不同濃度梯度用1,25（OH）2D3來處理細(xì)胞，提取細(xì)胞的核蛋白和RNA，并用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)p21WAFI／CIP1和HDAC2的mRNA水平，用Western blot印跡技術(shù)檢測(cè)HDAC2和p21WAFI／CIP1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、CCK-8試劑盒檢測(cè)顯示1,25（OH）2D3對(duì)肝癌細(xì)胞有抑制作用，并隨著加藥時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物濃度的增加，抑制率呈

3、現(xiàn)明顯升高趨勢(shì)，且各濃度實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較，差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、用核蛋白試劑盒和RNA提取試劑盒成功提取出加藥組.乙醇組和對(duì)照組的核蛋白和RNA。
　　3、RT-PCR檢測(cè)出在加藥后的24H，48H，72H隨著1,25（OH）2D3濃度的增高，HDAC2的mRNA表達(dá)水平呈降低趨勢(shì)，各時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;加藥后的24H，48H，72H隨著1,25（OH）2D3濃度的增高，p21WAFI／CIP

4、1的mRNA表達(dá)水平呈升高趨勢(shì)。
　　4、Western blot印跡技術(shù)檢測(cè)在加藥后的24H，48H，72H隨著1,25（OH）2D3濃度的增高，HDAC2的蛋白表達(dá)水平呈降低趨勢(shì)，各時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;加藥后的24H，48H，72H隨著1,25（OH）2D3濃度的增高，p21WAFI／CIP1的蛋白表達(dá)水平呈升高趨勢(shì)。
　　結(jié)論：
　　1、1,25（OH）2D3對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖有抑制作用。