鋅指蛋白A20抑制ox-LDL誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察ox-LDL對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)LOX-1、TLR-4 mRNA的表達(dá)情況、NF-к B活化及遷移能力的影響，并將含有鋅指蛋白A20基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染平滑肌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，觀察以上指標(biāo)的變化，來探討鋅指蛋白A20對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)．的VSMC損傷保護(hù)作用的可能效應(yīng)和機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)Sprague-Dawley(SD)大鼠主動(dòng)脈VSMC

2、隨機(jī)分成4組：A組(為空白對(duì)照組，培養(yǎng)液中不加任何干預(yù)因素培養(yǎng)48小時(shí))；B組(ox-LDL組，普通培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)，在培養(yǎng)基中加入50μg/ml的ox-LDL作用24小時(shí))；C組(A20組，向VSMC轉(zhuǎn)染含A20基因的質(zhì)粒后培養(yǎng)48小時(shí))；D組(ox-LDL+A20組，先向VSMC轉(zhuǎn)染含A20基因的質(zhì)粒，培養(yǎng)24小時(shí)后在培養(yǎng)基中加入50 μg/ml的ox-LDL作用24小時(shí))；收集以上各組細(xì)胞，提取mRNA用RT-PCR的方法檢測(cè)L

3、OX-1、TLR-4 mRNA的表達(dá)；提取核蛋白用western blot的方法檢測(cè)NF-к B核易位的量；進(jìn)行Boyden小室遷移實(shí)驗(yàn)，觀察各組平滑肌細(xì)胞的遷移能力。 結(jié)果：ox-LDL(50 μg/ml)刺激大鼠主動(dòng)脈VSMC 24小時(shí)后LOx-1、TLR-4 mRNA的表達(dá)及NF-кB的活化均明顯增加，平滑肌細(xì)胞遷移能力也顯著增強(qiáng)；轉(zhuǎn)染含A20基因質(zhì)粒的平滑肌細(xì)胞能完全抑制ox-LDL的以上作用，使TLR-4 mRNA的表

4、達(dá)、平滑肌細(xì)胞遷移能力達(dá)到正常水平，甚至能使LOX-1 mRNA的表達(dá)及NF-кB的核易位的量降低到正常水平以下。 結(jié)論： 1．ox-LDL能明顯激活平滑肌細(xì)胞NF-кB信號(hào)系統(tǒng)，并增強(qiáng)平滑肌細(xì)胞的遷移能力，可能由此激活動(dòng)脈壁的炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)平滑肌遷移至內(nèi)膜。觸發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生。 2．ox-LDL能夠刺激VSMC LOX-1、TLR-4 mRNA的表達(dá)增加及遷移能力的增強(qiáng)，而LOX-1、TLR-4作為跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)

5、導(dǎo)受體而起作甩，誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，因此ox-LDL誘導(dǎo)平滑肌細(xì)．胞LOX-1、TLR-4mRNA表達(dá)上調(diào)進(jìn)一步擴(kuò)大了LOX-1、TLR-4對(duì)血管壁細(xì)胞的損傷效應(yīng)，加速了動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。 3．轉(zhuǎn)染含有A20基因的質(zhì)粒明顯抑制了ox-LDL誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞LOX-1、TLR-4 mRNA表達(dá)的增加及VSMC遷移能力的增強(qiáng)，重要的是可能由此阻斷了ox-LDL引發(fā)的不斷級(jí)聯(lián)擴(kuò)大的正反饋效應(yīng)，充分阻止了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展；同