神經(jīng)顆粒素(Ng)異位表達(dá)與系統(tǒng)性紅斑狼瘡致病機(jī)制的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：（1）通過構(gòu)建綠色熒光蛋白標(biāo)記的Ng過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞來研究Ng的基本功能。（2）通過構(gòu)建和包裝含有目的基因Ng的慢病毒感染Jurkat細(xì)胞來研究Ng對T淋巴細(xì)胞功能的影響，進(jìn)而揭示神經(jīng)顆粒素在系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人中的致病機(jī)制。
　　方法：（1）用分子克隆技術(shù)構(gòu)建綠色熒光蛋白標(biāo)記的Ng真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-GFP-Ng，并轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，用western blot證實(shí)目的基因的表達(dá)、用IF明

2、確目的基因的細(xì)胞定位、用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡、CCK8檢測細(xì)胞增殖。（2）構(gòu)建和包裝表達(dá)Ng的慢病毒，感染Jurkat細(xì)胞，用western blot證實(shí)目的基因的表達(dá)、IF明確目的基因的細(xì)胞定位、流式細(xì)胞儀和DNA Ladder檢測細(xì)胞凋亡、CCK8檢測細(xì)胞增殖、ELISA檢測細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ的表達(dá)水平、qPCR檢測Ng、CaMKII和CaMKIV mRNA水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）本課題構(gòu)建了表達(dá)Ng的真核表