亞洲玉米螟絲素輕鏈基因的克隆、表達(dá)分析及RNAi.pdf

1、亞洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）是一種分布廣泛且多食性的害蟲，對(duì)我國的玉米、棉花危害較大。為研究亞洲玉米螟的吐絲機(jī)理，本文克隆了亞洲玉米螟的絲素輕鏈基因片段且進(jìn)行了全長拼接，并研究了在其不同發(fā)育階段、不同溫度、不同寄主條件下該基因的相對(duì)表達(dá)量;同時(shí)，通過飼喂法對(duì)亞洲玉米螟絲素輕鏈基因進(jìn)行了RNA干擾。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下:
　　1、采用RACE技術(shù)克隆到亞洲玉米螟絲素輕鏈基因的cDNA全長(已提交GeneBan

2、k:KF669645)。該基因全長1098bp，自39bp至830bp為其開放閱讀框，起始密碼子ATG，終止密碼子TAA，一共編碼263個(gè)氨基酸，相對(duì)分子量為92.76kDa，等電點(diǎn)pI為4.99。通過同源性比對(duì)，亞洲玉米螟絲素輕鏈基因與棉大卷葉螟（Sylepta derogata Fabricius）同源性最高，為75％，與外米綴蛾(Corcyra cephalonica)的同源性為69％;與大蠟螟(Galleria mellonel

3、la)的同源性為68％。
　　2、運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR，檢測了在不同發(fā)育階段、不同溫度條件、喂食不同寄主后亞洲玉米螟絲素輕鏈基因的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果表明，絲素輕鏈基因在5齡幼蟲時(shí)相對(duì)表達(dá)量最高，其次是2齡幼蟲與3齡幼蟲;當(dāng)幼蟲進(jìn)入預(yù)蛹后，該基因相對(duì)表達(dá)量開始降低，至成蟲時(shí)，相對(duì)表達(dá)量幾乎為零;研究了22℃，25℃，28℃，31℃，34℃條件下亞洲玉米螟絲素輕鏈基因的相對(duì)表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)34℃時(shí)相對(duì)表達(dá)量最高;在棉花、玉米、酸模葉蓼三種

4、寄主間，取食棉花的亞洲玉米螟絲素輕鏈基因的表達(dá)量最高，其次分別是玉米、酸模葉蓼。文章對(duì)處于逆境條件下玉米螟絲素輕鏈基因的相對(duì)表達(dá)量較高進(jìn)行了討論。
　　3、通過飼喂法，將表達(dá)目標(biāo)基因dsRNA的菌液飼喂亞洲玉米螟幼蟲，檢測沉默效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于喂食添加了清水的常規(guī)飼料的亞洲玉米螟幼蟲(CK)，喂食添加了表達(dá)dsRNA菌液飼料的亞洲玉米螟的絲素輕鏈基因表達(dá)量分別下調(diào)了34.81％、35.05％。經(jīng)過RNA干擾后，相對(duì)于對(duì)照，亞洲