MMP-1和TIMP-1在翼狀胬肉發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)的目的在于檢測翼狀胬肉組織中MMP-1和TIMP-1的表達(dá)水平，并評價(jià)不同劑量的中波紫外線輻射對培養(yǎng)的人正常結(jié)膜上皮細(xì)胞中MMP-1及TIMP-1表達(dá)的影響，以探討中波紫外線輻射對結(jié)膜上皮細(xì)胞中MMP-1表達(dá)的誘導(dǎo)作用，以期為預(yù)防及治療翼狀胬肉提供理論依據(jù)。 方法： 1．運(yùn)用免疫組化和RT-PCR技術(shù)檢測人翼狀胬肉與正常結(jié)膜組織中MMP-1和TIMP-1的蛋白質(zhì)及mRNA的表達(dá)。 2．培養(yǎng)了成人正常結(jié)膜及翼

2、狀胬肉上皮細(xì)胞，并對培養(yǎng)的正常結(jié)膜上皮細(xì)胞施以0～80mJ/cm<'2>的UVB輻射，運(yùn)用免疫組化和RT-PCR技術(shù)檢測各組結(jié)膜上皮細(xì)胞及翼狀胬肉上皮細(xì)胞中MMP-1及TIMP-1的蛋白質(zhì)和mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1．MMP-1的蛋白質(zhì)在翼狀胬肉的上皮層強(qiáng)烈表達(dá)，在正常結(jié)膜組織中未見陽性表達(dá)，二者之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TIMP-1蛋白質(zhì)在二者中的表達(dá)無明顯差異。相對應(yīng)的，MMP-1 mRNA在翼狀胬肉組織中表達(dá)

3、，正常結(jié)膜組織中亦未見MMP-1 mRNA的擴(kuò)增條帶，TIMP-1 mRNA在二者中均有表達(dá)。 2．本實(shí)驗(yàn)采用改良的組織塊法成功地進(jìn)行了成人的正常結(jié)膜上皮細(xì)胞及成人翼狀胬肉上皮細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)，并經(jīng)角蛋白染色鑒定證實(shí)為上皮細(xì)胞。 3．不同劑量的UVB照射后結(jié)膜上皮細(xì)胞中MMP-1的表達(dá)水平與UVB輻射存在劑量依賴關(guān)系。未照射組和10 mJ/cm<'2>組未見MMP-1蛋白質(zhì)和mRNA的陽性表達(dá)；20 mJ/cm<'2

4、>組的結(jié)膜上皮細(xì)胞中開始出現(xiàn)MMP-1的陽性表達(dá)，從20～60 mJ/cm<'2>組其表達(dá)水平依次升高；60 mJ/cm<'2>組與前兩組相比，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；60 mJ/cm<'2>組MMP-1的表達(dá)水平比翼狀胬肉上皮細(xì)胞組低，且差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；80 mJ/cm<'2>組的細(xì)胞經(jīng)照射后出現(xiàn)“拉網(wǎng)”現(xiàn)象，在繼續(xù)培養(yǎng)的過程中逐漸脫壁、死亡。而TIMP-1的蛋白質(zhì)和mRNA在各組正常結(jié)膜上皮細(xì)胞和翼狀胬肉上皮細(xì)胞中均有陽性表達(dá)，差異

5、無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1．翼狀胬肉組織中MMP-1蛋白質(zhì)和mRNA高表達(dá)，其特異的組織抑制因子TIMP-1蛋白質(zhì)和mRNA的表達(dá)水平未隨之相應(yīng)升高。 2．UVB輻射誘導(dǎo)了正常結(jié)膜上皮細(xì)胞中MMP-1蛋白質(zhì)和tuRNA的表達(dá)，且MMP-1的表達(dá)水平與UVB輻射存在明顯的劑量依賴關(guān)系。TIMP-1的表達(dá)不受UVB輻射的影響。 3．采用改良的組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行成人的正常結(jié)膜上皮細(xì)胞及翼狀胬肉上皮細(xì)胞的原代和傳代