不同培養(yǎng)代數(shù)和接種密度骨髓間質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實驗研究.pdf

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文不同培養(yǎng)代數(shù)和接種密度骨髓間質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實驗研究姓名：袁正兵申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：高梁斌20070501廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文不同培養(yǎng)代數(shù)和接種密度骨憾間質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實驗研究方法IMSCs細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：應(yīng)用Percoll細(xì)胞分離液對兔骨髓行密度離心，分離得到MSCs并傳代，觀察各代MSCs生長狀況；取第四代MSCs行成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)，觀察MSCs在成骨分化條件下的生長狀況

2、，分別行改良的Kaplow法染色和改良的YonKossa法染色，檢測MSCs成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)后堿性磷酸酶的表達和鈣化節(jié)結(jié)的形成。2第1—5代MSCs增殖能力檢測：應(yīng)用四唑鹽(MTT)比色法檢測第l一5代MSCs傳代培養(yǎng)后各時間點的oD值，采用統(tǒng)計學(xué)方法比較各代MSCs的增殖能力。3第l一5代MSCs成骨分化能力檢測：應(yīng)用堿性磷酸酶(ALP)測定試劑盒檢測第l一5代MSCs成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)后的ALP活性，采用統(tǒng)計學(xué)方法比較各代MSCs的成

3、骨分化能力。4術(shù)后大體觀察和影像學(xué)檢查：取第4代的同種異體MSCs進行成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)，配成025106、05X106、1X106、2i06和4i06／m1五個接種密度組，并以培養(yǎng)液作為空白對照組，體外構(gòu)建組織工程骨，完全隨機化植入雙側(cè)橈骨中段節(jié)段性骨缺損動物模型。術(shù)后進行大體觀察，并在第2、4、8和12周拍前肢側(cè)位片，觀察各組的骨缺損修復(fù)情況并評分，采用統(tǒng)計學(xué)方法比較不同接種密度構(gòu)建的組織工程骨骨缺損修復(fù)效果。5組織工程骨生物力學(xué)檢測

4、：術(shù)后第12周取出橈骨標(biāo)本，立即在生物力學(xué)實驗機上進行三點彎曲，檢測最大載荷，采用統(tǒng)計學(xué)方法比較不同接種密度構(gòu)建的組織工程骨體內(nèi)成骨后的生物力學(xué)性能。6組織工程骨組織形態(tài)學(xué)觀察：標(biāo)本行HE染色，觀察各組標(biāo)本支架材料的吸收和骨缺損的愈合情況，比較不同接種密度構(gòu)建的組織工程骨正位成骨效果。結(jié)果1MSCs細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變：密度離心法分離得到的MSCs形態(tài)較為一致，長梭形樣，呈單層、漩渦樣生長，未見復(fù)層生長，第2代以后細(xì)胞形態(tài)更為一致，傳代至第5