大鼠牙髓干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化成骨樣細(xì)胞能力對比研究.pdf

1、目的：提取大鼠牙髓干細(xì)胞(Dental Pulp Stem Cells,DPSCs)與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs),傳代培養(yǎng)觀察二者形態(tài)學(xué),以及其生長差異。免疫熒光染色觀察大鼠牙髓干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)。通過礦化誘導(dǎo),觀察大鼠牙髓干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨樣細(xì)胞分化能力,并通過免疫熒光對其進行表面成骨標(biāo)志物檢測,觀察其鈣化結(jié)節(jié)形成能力,對比討論大鼠牙髓干細(xì)胞的成骨樣細(xì)

2、胞分化能力與特點。
　　 方法：通過離心法獲得大鼠骨髓細(xì)胞,全骨髓體外貼壁培養(yǎng)擴增,并通過倒置顯微鏡觀察其形態(tài)；通過酶消化法處理大鼠牙髓組織獲得牙髓干細(xì)胞,體外培養(yǎng)擴增,通過倒置顯微鏡觀察形態(tài)。通過流式細(xì)胞儀檢測所獲得細(xì)胞表面CD45,CD90分子表達(dá)；通過免疫熒光染色檢測細(xì)胞表面STRO-1表達(dá)；MTT法分別測得大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與牙髓干細(xì)胞的生長曲線,對照分析,比較二者在生長擴增上的差異;分別對大鼠牙髓干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干

3、細(xì)胞進行礦化誘導(dǎo)培養(yǎng),2周后對其進行骨鈣素(OCN),牙本質(zhì)泌涎蛋白(DSP)免疫熒光染色；繼續(xù)培養(yǎng)四周,對經(jīng)誘導(dǎo)的大鼠牙髓干細(xì)胞進行茜素紅染色觀察鈣結(jié)節(jié)形成情況。
　　 結(jié)果：通過離心法獲得的大鼠骨髓細(xì)胞經(jīng)過貼壁培養(yǎng),換液逐漸將造血系細(xì)胞清除,得到相對純度較高的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長；通過酶消化法獲得的大鼠牙髓干細(xì)胞第二天可完全貼壁生長；所獲得的細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測CD45表達(dá)陰性,CD90表達(dá)陽性,符合間充質(zhì)干細(xì)胞特性；免

4、疫熒光染色STRO-1表達(dá)陽性,符合干細(xì)胞表達(dá)特性；MTT法繪制生長曲線可見大鼠牙髓干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞第4天左右進入生長對數(shù)期,牙髓干細(xì)胞生長增殖速度快于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；經(jīng)過礦化誘導(dǎo)2周后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與牙髓細(xì)胞表達(dá)成骨細(xì)胞表面標(biāo)志物OCN陽性,牙髓干細(xì)胞表達(dá)牙本質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物DSP陽性；經(jīng)4周礦化誘導(dǎo)培養(yǎng),大鼠牙髓干細(xì)胞茜素紅染色證實有礦化結(jié)節(jié)生成。
　　 結(jié)論：通過離心獲得的骨髓細(xì)胞經(jīng)全骨髓貼壁培養(yǎng)可隨著貼壁換液的進