Rho-Rock在肺成纖維細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化中的作用.pdf

1、間質(zhì)性肺疾病/肺纖維化是嚴(yán)重危害人類健康的一組疾病，其發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)。由于大部分病因不明，發(fā)病機(jī)制不十分清楚，目前尚無(wú)有效的治療方案。雖然肺組織已有的纖維化病變難以消除，但肺纖維化是一個(gè)慢性、進(jìn)行性的病理反應(yīng)過(guò)程，探索肺纖維化發(fā)病的分子機(jī)制以延緩或阻斷纖維化發(fā)展進(jìn)程的策略，仍具有重要的實(shí)際意義，一直是國(guó)際肺科學(xué)界的關(guān)注熱點(diǎn)。 在纖維化的發(fā)展過(guò)程中，肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，起關(guān)鍵作用。肌成纖維細(xì)胞是一種在超微結(jié)構(gòu)和功

2、能上兼有成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞兩者特征的非典型的成纖維細(xì)胞，特征性表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin．α-SMA)。多種細(xì)胞因子具有促進(jìn)這種轉(zhuǎn)化的作用，其中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factor，TGF-β)的作用是肯定的，TGF-β/Smad促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化構(gòu)成了肺纖維化發(fā)病過(guò)程中一個(gè)較為明確的機(jī)制，實(shí)驗(yàn)證明其是肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的主要通路，但不是唯一通路。有研究發(fā)現(xiàn)R

3、ho-Rock信號(hào)通路調(diào)控肌成纖維細(xì)胞表型標(biāo)志α-SMA的表達(dá)，但其具體機(jī)制尚不清楚。因此我們有理由假設(shè)，Rho-Roek和FGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路共同參與了成纖維細(xì)胞．肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，且可能存在轉(zhuǎn)導(dǎo)通路間的交叉路徑，因而在肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。如果我們的假設(shè)能得到驗(yàn)證，不僅可以完善Rho-Rock系統(tǒng)，為Rho--Rock信號(hào)通路在肺纖維化中作用給予更客觀的評(píng)價(jià)，而且可以進(jìn)一步完善TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)

4、導(dǎo)通路。 目的：明確在TGF-β1刺激下， Rho-Roek對(duì)肺成纖維細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響；探討Rho-Rock通路在肺纖維化中的作用，以及Rho-Rock與TGF-β/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肺纖維化中的交叉路徑，為防治肺纖維化提供新的理論依據(jù)。 方法：體外培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞，以TGF-β1刺激和在刺激的同時(shí)添加抑制劑Y-27632(Rho-Rock通路阻斷劑)或Staurosporine(絲/蘇氨酸激酶抑

5、制劑為T(mén)GF-β/Smad通路阻斷劑)，采用流式細(xì)胞儀和免疫熒光法檢測(cè)α-SMA 的表達(dá)，流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞周期分布，ELISA法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液ECM含量，PT-PCR法檢測(cè)RhoA、RhoC、Rockl和Smad2 mRNA水平的變化。結(jié)果： (1) TGF-β1 可顯著促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞α-SMA的表達(dá)，表明向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化增多；而用Y-27632或Staurosporine處理后，α-SMA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯下降。

6、 (2)TGF-β1 刺激下肺成纖維細(xì)胞 G<,0>/G<,1>期細(xì)胞數(shù)下降，S期細(xì)胞數(shù)增多；而用Y-27632或Staurosporine處理后，G<,0>/G<,1>期細(xì)胞數(shù)增加，S期和G<,2>/M期細(xì)胞數(shù)下降。 (3)TGF-β1 增加肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中Ⅰ型膠原、LN、FN蛋白的含量；而用Y-27632或Staurosporine處理后，Ⅰ型膠原、LN、FN蛋白含量均下降。 (4) TGF-β1 增加肺成纖

7、維細(xì)胞RhoA、RhoC、Rock1、Smad2 mRNA的表達(dá)：而用Y-27632或Staurosporine處理后，RhoA、Rock1、Smad2 mRNA表達(dá)下降，此外Y-27632抑制RhoC mRNA的表達(dá)。 結(jié)論： (1) Rho-Rock通路參與肺成纖維細(xì)胞——肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程，阻斷該通路抑制成纖維細(xì)胞增殖、ECM的合成。 (2) Rho-Rock信號(hào)通路與TGF-β/Smad信號(hào)通路之間