葛根素對胰島素抵抗大鼠骨骼肌PKBmRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：胰島素抵抗是多種疾病如2型糖尿病、肥胖、高血壓、高脂血癥、冠心病的共同發(fā)病基礎(chǔ)。骨骼肌中胰島素介導(dǎo)的葡萄糖利用障礙是外周胰島素抵抗發(fā)生的主要原因。對胰島素抵抗進(jìn)行早期治療性干預(yù)，有利于阻止或延緩糖耐量異常進(jìn)一步發(fā)展為臨床糖尿病。目前改善胰島素抵抗的藥物研制主要集中在西藥方面，而中藥在這方面的研究較少。葛根素是從豆科植物野葛的干燥根中提取的單體，己有很多臨床研究表明，它可通過多種途徑改善胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)。蛋白激酶B(proteinki

2、nase，PKB)在胰島素調(diào)節(jié)葡萄糖、脂質(zhì)代謝中起著重要作用，其活性改變和/或表達(dá)缺陷，可能參與胰島素抵抗和2型糖尿病的發(fā)病。 本課題通過高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)形成胰島素抵抗大鼠動物模型，觀察葛根素對胰島素抵抗大鼠骨骼?。甈KBmRNA表達(dá)的影響，進(jìn)而探討葛根素對胰島素敏感性的作用及其分子機(jī)制。 方法： 1、動物分組及藥物干預(yù)：70只Wistar大鼠隨機(jī)分為對照組(Nomal Control,NC組n=20)，高脂組(Hi

3、gh fatdiet．HF組n=50)。對照組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)，高脂組大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)。所有飼料均由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心供應(yīng)。用高胰島素-正葡萄糖鉗夾實驗，測定葡萄糖輸注率(GIR)。胰島素抵抗大鼠造模成功后，將高脂組隨機(jī)分為3個亞組，即高脂對照組(Hyperlipoidemia HL組，n=14)；高脂+羅格列酮干預(yù)組(Hyperlipoidemia +rosiglitazone組HL+Rosi n=14)，將羅格列酮片溶

4、于適量生理鹽水，按大鼠體重予以羅格列酮3mg·Kg<'-1>·d<'-1>灌胃干預(yù)治療。高脂+葛根素干預(yù)組(Hyperlipoideinia+Puerarin，HL+Pue組n=14)，葛根素注射液100mg·Kg<'-1>·d<'-1>治療，每日清晨腹腔注射1次。HL組給予等量的生理鹽水每日清晨腹腔注射1次，共4周。 2、動物處理及標(biāo)本取得：第4、8周末監(jiān)測各組大鼠體重、血壓，并心臟采血測游離脂肪酸(FFA)，血清甘油三酯(

5、TG)，血清總膽固醇(TC)；各組隨機(jī)抽取6只大鼠，清醒狀態(tài)下行高胰島素一正葡萄糖鉗夾實驗，實驗前及達(dá)穩(wěn)態(tài)血糖后各取血1mL，用于空腹血糖、胰島素及穩(wěn)態(tài)胰島素測定；第8周末，各組另取8只大鼠麻醉后迅速取骨四頭肌組織，采用熒光定量RT-PCR法及計算機(jī)圖像分析系統(tǒng)分析各組骨骼肌中PKBmRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1、高脂喂養(yǎng)4周后，高脂組空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)，胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)均較對

6、照組顯著升高，而胰島素敏感指數(shù)(ISI)下降(P<0.05)，GIR顯著低于對照組(P<0.01)，說明高脂組存在胰島素抵抗，胰島素抵抗模型制造成功。 2、經(jīng)葛根素、羅格列酮組干預(yù)4周后，高脂葛根素組、高脂羅格列酮組GIR顯著升高，與高脂對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而高脂葛根素組與高脂羅格列酮組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 3、一般項目指標(biāo)：高脂組與對照組相比，高脂組的血壓、血清總膽固醇、甘油三酯含

7、量、血清游離脂肪酸均升高，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。經(jīng)葛根素注射液、羅格列酮干預(yù)4周后，高脂葛根素組、高脂羅格列酮組血壓、血清游離脂肪酸、血清總膽固醇、甘油三脂明顯降低。與高脂對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，而高脂葛根素組和高脂羅格列酮組無顯著性差異。對照組、高脂組、高脂葛根素組、高脂羅格列酮組之間體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 4、高脂組與對照組相比，高脂組PKBmRNA表達(dá)明顯減低

8、，而高脂葛根素組、高脂羅格列酮組PKBmRNA表達(dá)較高脂對照組升高，各組間PKBmRNA表達(dá)水平差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，高脂葛根素組、高脂羅格列酮組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 5、相關(guān)分析：GIR與TC、TG、INS、FFA呈明顯負(fù)相關(guān)，r值分別為-0.659(P<0.01)、-0.4377(P<0.01)、-0.3989(P<0.01)、-0.4672(P<0.05、)；PKBmRNA與TC、TG、

9、INS、FFA呈明顯負(fù)相關(guān)，r值分別為-0.4790(P<0.05)、-0.4561(P<0.05)、-0.4850(P<0.05)、-0.4672(P<0.05)。 結(jié)論： 1、高脂喂養(yǎng)Wistar大鼠4周，大鼠的FINS明顯升高、GIR顯著低于對照組大鼠，表明高脂飼料喂養(yǎng)的大鼠存在高胰島素血癥，胰島素敏感性明顯降低，即胰島素抵抗形成。 2、葛根素可降低血壓、血清總膽固醇、甘油三酯、游離脂肪酸、空腹血糖及胰島素

10、，胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)得以改善。葛根素改善胰島素抵抗的作用與羅格列酮的作用相似。 3、高脂組大鼠骨骼肌組織中PKBmRNA表達(dá)水平明顯下降，羅格列酮與葛根素都可使高脂組大鼠骨骼肌組織中PKBmRNA表達(dá)增加，這可能是葛根素改善胰島素抵抗的機(jī)制之一。 4、經(jīng)相關(guān)分析表明，葡萄糖輸注率與血清甘油三酯、總膽固醇、游離脂肪酸、胰島素呈顯著負(fù)相關(guān)，PKBmRNA與血清甘油三酯、總膽固醇、游離脂肪酸、胰島素呈顯著負(fù)相關(guān)，提示葡萄糖輸注率