仙珍骨寶對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的防治作用.pdf

1、[目的]
　　 采用骨組織形態(tài)計量學、生物力學和對骨礦物質(zhì)含量及其有關生化指標檢測等方法觀察不同劑量仙珍骨寶對去卵巢大鼠骨代謝和生物力學的影響，并與己烯雌酚的作用比較，探討仙珍骨寶預防去卵巢骨質(zhì)疏松的作用機制，為仙珍骨寶在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松(PMOP)防治的臨床開發(fā)應用提供理論和實驗依據(jù)。
　　 [方法]
　　 60只3月齡清潔級SD雌性大鼠，隨機分成6組，1組為假手術(shù)(SHAM)組，灌胃自來水5ml/kg/d，連續(xù)

2、90天；2組為去卵巢(OVX)組，灌胃自來水5ml/kg/d，連續(xù)90天；3組為去卵巢加已烯雌酚(OVX+DES)組，灌胃己烯雌酚5ml/kg/d，連續(xù)90天。4、5、6組分別為去卵巢加低、中、高劑量仙珍骨寶組，分別灌胃25％、50％、100％仙珍骨寶水提液(5ml/kg/d)，連續(xù)90天。所有大鼠被處死前13、14天皮下注射25mg/kg鹽酸四環(huán)素一次，于被處死前3、4天皮下注射鈣黃綠素5mg/kg各一次，兩熒光標記間隔10天。實驗結(jié)

3、束后，大鼠腹腔注射3％戊巴比妥鈉(1.5ml/kg)麻醉，心臟取血處死大鼠，收集血液進行骨轉(zhuǎn)化血生化指標檢測；取左側(cè)脛骨、第4腰椎行不脫鈣骨包埋、制片和染色，通過半自動圖像分析系統(tǒng)進行骨組織形態(tài)計量學檢測；用858Mini Bionix型材料測試系統(tǒng)分析右側(cè)股骨(三點彎曲試驗)的生物力學性能；取右側(cè)尺骨用鹽酸溶解后測定其骨羥脯氨酸(HYP)和骨礦物元素的含量。
　　 [結(jié)果]
　　 1.去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的特點
　

4、　 1.1體重以及內(nèi)臟器官重量的改變：與SHAM組比較，OVX組大鼠體重增加了23.6％(P<0.05)、胸腺體重比增加了80.9％(P<0.05)、子宮體重比減少了77.2％(P<0.05)，肝臟、腎臟和腎上腺體重比變化無統(tǒng)計學意義。
　　 1.2血生化的改變：與SHAM組比較，OVX組白介素6(IL-6)血清濃度減少22％(P>0.05)，堿性磷酸酶(ALP)血清濃度增加了39.5％(P>0.05)，抗酒石酸酸性磷酸酶(S

5、trACP)濃度減少了6.3％(P>0.05)。
　　 1.3血清微量元素改變特點：與SHAM組比較，OVX組的血清鈣(Ca)濃度增加了3.4％(P>0.05)，血清鐵(Fe)濃度減少了30.0％(P>0.05)，血清磷(P)減少了21.0％(P>0.05)。
　　 1.4有機物質(zhì)HYP與骨礦元素含量的改變：與SHAM組比較，OVX組大鼠HYP與骨礦元素含量變化無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 1.5骨形態(tài)計

6、量學變化特點：
　　 1.5.1腰椎松質(zhì)骨：與SHAM組比較，OVX組大鼠腰椎松質(zhì)骨的骨小梁面積百分率(％Tb.Ar)、骨小梁數(shù)量(Tb.N)分別減少了36.9％和32.4％(P<0.05)；而骨小梁分離度(Tb.Sp)、單位骨小梁周長破骨細胞數(shù)(Oc.N)、破骨細胞周長百分數(shù)(％Oc.Pm)分別增加了76.8％、66.1％、166.7％(P<0.05)；熒光周長百分數(shù)(％L.Pm)、骨形成率指標(BFR/BS、BFR/BV)分

7、別增加了183.5％、187％、220.1％，差異顯著，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 1.5.2脛骨上段松質(zhì)骨：與SHAM組比較，OVX組大鼠脛骨上段松質(zhì)骨％Tb.Ar、Tb.N分別減少了76.5％、76.7％(P<0.05)；Tb.Sp、Oc.N、％Oc.Pm分別增加了474.8％、373.3％、93.80％(P<0.05)；％L.Pm、BFR/BS、BFR/TV分別增加了25.9％、30.5％、29％(P<0.05)

8、。
　　 1.6股骨骨生物力學的改變：與SHAM組比較，OVX組股骨生物力學最大載荷下降10.5％(P<0.05)，股骨剛性系數(shù)減少無統(tǒng)計學意義。
　　 2.己烯雌酚對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的影響
　　 2.1體重以及內(nèi)臟器官重量的改變：與OVX組比較，OVX+DES組大鼠體重顯著減少、胸腺體重比明顯減少、子宮體重比明顯增加，差異顯著，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 2.2血生化的改變：與OVX組比較，

9、OVX+DES組大鼠IL-6血清濃度增加了42.9％，ALP血清濃度減少了23.7％，StrACP濃度增加了14.0％，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 2.3有機物質(zhì)HYP與骨礦元素含量的改變：與OVX組比較，OVX+DES組大鼠HYP含量增加了95.8％(P>0.05)；骨Ca、骨Fe、骨Zn分別增加了190％、650％、660％(P<0.05)，骨Mg、骨P變化差異無統(tǒng)計學意義。
　　 2.4骨形態(tài)計量學

10、表現(xiàn)特點
　　 2.4.1腰椎松質(zhì)骨：與OVX組比較，OVX+DES組大鼠腰椎松質(zhì)骨的％Tb.Ar、Tb.N分別增加了30.5％、19.5％(P<0.05)，而Tb.Sp、Oc.N、％Oc.Pm分別降少了26.2％、37.4％、58.8％(P<0.05)；％L.Pm、BFR/BS、BFR/BV分別減少了77.1％、77.2％、74.2％(P<0.05)。
　　 2.4.2脛骨上段松質(zhì)骨：與OVX組比較，OVX+DES組大

11、鼠脛骨上段松質(zhì)骨的％Tb.Ar、Tb.N分別增加了231.2％、253.6％，Tb.Sp、Oc.N、％Oc.Pm分別減少了77.8％、48.5％、38.9％(P<0.05)；％L.Pm、BFR/BS、BFR/BV均減少，但是差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 2.5股骨骨生物力學的改變：與OVX組比較，OVX+DES組股骨剛性系數(shù)增加了18.6％，最大載荷增加了10.4％，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　

12、 3.仙珍骨寶對去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的影響
　　 3.1體重以及內(nèi)臟器官重量的改變：(1)與SHAM組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組體重明顯增加(P<0.05)、OVX+仙高組體重增加無統(tǒng)計學意義；(2)與SHAM組比較，OVX+仙中組肝臟體重比明顯降低(P<0.05)；(3)與SHAM組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組子宮體重比均明顯減少(P<0.05)；(4)與SHAM組比較，OVX+仙低組、OVX+

13、仙中組、OVX+仙高組腎上腺重量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；(5)與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組體重減少分別為6.2％、4.8％、10.4％，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；(6)與OVX組比較，OVX+仙低組胸腺體重比明顯減低(P<0.05)，OVX+仙中組和OVX+仙高組胸腺體重比減少不明顯(P>0.05)；(7)與OVX+DES組比較，OVX+仙低組腎上腺體重比明顯減少(P<0.05)；(8

14、)仙珍骨寶三個劑量組之間比較，各內(nèi)臟器官體重比變化無統(tǒng)計學意義。
　　 3.2血生化的改變：(1)與SHAM組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組IL-6血清濃度均有所增加，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；(2)與SHAM組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組ALP血清濃度均減少，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；(3)與OVX組比較，OVX+仙低組ALP血清濃度顯著降低(P<0.05)；(4)與O

15、VX+DES組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組ALP分別下降9.3％，2.1％(P>0.05)，OVX+仙高組ALP增加2.6％(P>0.05)；(5)仙珍骨寶三個劑量組之間比較，各內(nèi)臟器官重量變化無統(tǒng)計學意義。
　　 3.3血清元素改變特點：(1)與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組血清Ca濃度無明顯變化(P>0.05)；(2)與SHAM組比較，OVX+仙低組血清Mg濃度顯著減少(P<0.05)；

16、(3)與OVX+仙低組比較，OVX+仙中組Mg濃度顯著增加(P<0.05)；仙珍骨寶三個劑量組之間比較，各血清元素濃度變化無統(tǒng)計學意義。
　　 3.4有機物質(zhì)HYP與骨礦元素含量的改變：(1)與SHAM組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組尺骨HYP含量分別增加了125.7％、119.4％、83.27％，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組尺骨HYP含

17、量分別明顯增加了74.3％，70.2％，42.2％，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；(2)與SHAM組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組骨鈣分別增加了58.9％(P>0.05)，190.3％(P<0.05)，124.4％(P<0.05)；與OVX組比較，OVX+仙中組、OVX+仙高組骨鈣含量顯著增加(P<0.05)；(3)與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組骨鐵含量分別增加了250％(P>

18、0.05)，500％(P<0.05)，650％(P<0.05)；(4)與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組骨鎂含量分別增加了34.6％(P>0.05)，84.6％(P<0.05)，61.5％(P<0.05)；(5)與SHAM組比較，OVX+仙低組骨磷含量明顯增加(P<0.05)；與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組骨磷含量分別增加了13.7％，45.1％，21.6％，均無統(tǒng)計學意義(P

19、>0.05)；(6)與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組骨鋅含量分別增加了480％(P>0.05)，860％(P<0.05)，660％(P<0.05)；(7)與OVX+DES組比較，OVX+仙低組骨鈣、骨鐵含量顯著減少(P<0.05)，OVX+仙中組、OVX+仙高組HYP和各礦物質(zhì)含量變化均無統(tǒng)計學意義；(8)仙珍骨寶三個劑量組之間比較，與OVX+仙中組比較，OVX+仙高組HYP和骨鈣含量分別減少16.5％，2

20、2.7％(P>0.05)；與OVX+仙低組比較，OVX+仙中組骨鈣、鐵、鎂、磷、鋅分別增加了82.7％、71.4％、37.1％、27.6％、65.5％。由此可見，對于提高尺骨有機質(zhì)與骨礦物質(zhì)含量療效比較，仙珍骨寶中劑量組>仙珍骨寶高劑量組>仙珍骨寶低劑量組，且中劑量組在此效果和陽性對照DES組相當。
　　 3.5骨形態(tài)計量學表現(xiàn)特點
　　 3.5.1腰椎松質(zhì)骨：(1)與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX

21、+仙高組三組大鼠腰椎松質(zhì)骨的％Tb.Ar、Tb.Th差異均無顯著意義，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組Tb.N分別增加了3.0％、15.4％、2.3％；OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組Tb.Sp分別減少了7.2％(P>0.05)、17.1％(P>0.05)、5.8％(P>0.05)；OVX+仙低組Oc.N顯著減少35.4％(P<0.05)，OVX+仙高組Oc.N顯著減少38.1％(P<0.05)；OVX+仙高

22、組％Oc.Pm顯著減少61.2％(P<0.05)；(2)而與OVX+DES組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組各項靜態(tài)參數(shù)均無顯著差異(P>0.05)；(3)與OVX組比較，OVX+仙低組％L.Pm明顯減少(P<0.05)，BFR/BS明顯減少(P<0.05)，BFR/BV減少52.6％，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與OVX組比較，OVX+仙中組％L.Pm明顯減少(P<0.05)，BFR/BS、BFR/BV減少

23、但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；與OVX組比較，OVX+仙高組％L.Pm明顯減少(P<0.05)，BFR/BS明顯減少(P<0.05)，BFR/BV減少54.8％，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；(7)與OVX+DES組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組各動靜態(tài)參數(shù)變化均無統(tǒng)計學意義；(8)仙珍骨寶三個劑量組之間比較，OVX+仙高組Tb.Sp比OVX+仙中組增加13.6％(P>0.05)，OVX+仙高組％Tb.

24、Ar、MAR、BFR/BS、BFR/BV比OVX+仙中組分別減少了6.7％、13.7％、13.4％、12.0％(P>0.05)。提示不同劑量仙珍骨寶組對于恢復腰椎松質(zhì)骨量療效為中劑量組大于高、低劑量組。
　　 3.5.2脛骨上段松質(zhì)骨：(1)與SHAM組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組％Tb.Ar、Tb.N均顯著降低(P<0.05)；(2)與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組Tb.S

25、p、Oc.N、％Oc.Pm均減少，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；(3)而與OVX+DES組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組各項靜態(tài)參數(shù)均無顯著差異；(4)與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組％L.Pm、BFR/BS、BFR/BV均減少(P>0.05)，OVX+仙高組％L.Pm、BFR/BV顯著減少(P<0.05)；(5)與OVX+仙低組比較，OVX+仙高組骨形成指標均BFR/BS、BFR/BV顯著增加(P

26、<0.05)。(7)與OVX+DES組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組各動靜態(tài)參數(shù)變化均無統(tǒng)計學意義；(8)仙珍骨寶三個劑量組之間比較，OVX+仙高組％Tb.Ar、Tb.N比OVX+仙中組分別減少38.1％、39.3％(P>0.05)，OVX+仙高組Tb.Sp比OVX+仙中組分別增加了70.1％(P>0.05)；OVX+仙高組MAR、BFR/BS、BFR/BV比OVX+仙中組均不同程度增加(P>0.05)，但綜合骨形

27、成與骨吸收指標，對于恢復去卵巢大鼠脛骨上段松質(zhì)骨骨量療效，仙珍骨寶中劑量組>仙珍骨寶高劑量組>仙珍骨寶低劑量組。
　　 3.6股骨骨生物力學的改變：(1)與SHAM組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組股骨剛性系數(shù)均增加(P>0.05)，OVX+仙低組最大載荷減少了10.5％(P>0.05)；(2)與OVX組比較，OVX+仙低組、OVX+仙中組、OVX+仙高組股骨剛性系數(shù)分別增加了17.7％(P>0.05)、17

28、.7％(P>0.05)、32.6％(P<0.05)，股骨最大載荷分別增加了2.5％(P>0.05)、10.2％(P>0.05)、8.4％(P>0.05)；(2)與OVX+DES組，OVX+仙低組最大載荷數(shù)下降7.9％(P>0.05)；OVX+仙中組、OVX+仙高組股骨剛性系數(shù)和股骨最大載荷變化均無統(tǒng)計學意義；(3)三個劑量組之間比較，OVX+仙中組、OVX+仙高組最大載荷數(shù)比OVX+仙低組分別增加了7.8％、6.7％。對股骨生物力學的作

29、用可見，仙珍骨寶中、高劑量組療效高于仙珍骨寶低劑量組。
　　 [結(jié)論]
　　 1雌性大鼠去卵巢后呈現(xiàn)高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松，其特點是：雌性大鼠去卵巢后體重增加，子宮體重比以及胸腺體重比減輕，與絕經(jīng)期后婦女的臨床表現(xiàn)相似；脛骨上段和腰椎的松質(zhì)骨均發(fā)生骨量減少，骨的三維結(jié)構(gòu)變差，脛骨上段骨形成率和骨轉(zhuǎn)換率增高；股骨的骨生物力學性能下降，骨質(zhì)量明顯變差。
　　 2己烯雌酚可以預防去卵巢大鼠的骨丟失，對大鼠不同部位的骨骼的作用

30、不同，對去卵巢脛骨上段松質(zhì)骨的作用最明顯，對腰椎松質(zhì)骨的作用較小，同時具有刺激肝臟、胸腺、子宮、腎上腺等內(nèi)臟器官的不良反應。
　　 3各個劑量組的仙珍骨寶對于去卵巢致大鼠骨質(zhì)疏松癥均有一定的防治作用。仙珍骨寶可以抑制去卵巢大鼠體重增加，而對子宮、腎上腺等內(nèi)臟器官無明顯刺激。仙珍骨寶使去卵巢大鼠HYP和骨礦物質(zhì)含量明顯增加。仙珍骨寶作用于去卵巢致骨質(zhì)疏松大鼠不同部位骨骼的松質(zhì)骨顯微結(jié)構(gòu)變化特點如下：脛骨上段和腰椎的松質(zhì)骨骨量均有一