金絲小棗多糖的研究.pdf

1、棗(Zizyphus jujuba Mill.)為鼠李科(Rhamnaceae)棗屬落葉喬木，其廣泛分布在亞洲和美洲的熱帶、亞熱帶地區(qū)。我國是世界上棗的主要生產(chǎn)國和唯一出口國，90％以上的棗產(chǎn)于我國。棗不僅是滋補佳品，而且也是一味傳統(tǒng)的中藥，因富含營養(yǎng)和保健成分而享譽中外，為我國傳統(tǒng)藥食兼用果品。然而，我國棗資源開發(fā)利用程度較低，缺乏對其進行相應(yīng)的精深加工技術(shù)及其功能性的系統(tǒng)研究。目前，多糖由于其具有促進多種免疫缺損疾病、抗腫瘤、抗補體

2、、降低血糖血脂等功能而備受關(guān)注。本論文通過研究分析五種常用棗的基本營養(yǎng)成分，確定了以金絲小棗(ZiZyphus Jujuba cv.Jinsixiaozao．)為試驗原料，系統(tǒng)研究了金絲小棗多糖的提取、分離純化、結(jié)構(gòu)特征和免疫活性，并對五種棗的抗氧化性進行了深入分析。 通過分析五種棗(金絲小棗、駿棗、牙棗、尖棗、三變紅棗)的總糖、還原糖、粗纖維、蛋白質(zhì)、脂肪、礦物質(zhì)、維生素等成分，并對它們進行分析比較，確定了金絲小棗作為提取棗多

3、糖的較佳原料。 運用響應(yīng)面分析方法，探討了超聲波提取金絲小棗多糖的優(yōu)化工藝。通過考察超聲功率、超聲時間、提取溫度、料液比對金絲小棗多糖得率與純度的影響，得出金絲小棗多糖最佳的提取工藝條件為：超聲功率86W-96W，提取溫度45℃-53℃，提取時間20min，料液比1:20。與傳統(tǒng)的水浴浸提法相比，該方法不僅縮短了提取時間，且金絲小棗多糖的得率從6.52％增加到8.11％，純度增加了1.2倍。超聲波提取法和傳統(tǒng)水浴浸提法所得粗多糖

4、的單糖主要有阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glu)、半乳糖(Gal)，兩種方法提取粗多糖的組成基本是一致的。用紅外光譜分析超聲波與水浴浸提這兩種方法所得棗多糖，可知兩種方法所得的棗多糖的峰形位置基本相同；且超聲波提取法與傳統(tǒng)浸提法所得的棗多糖免疫功效基本相同。 與其它脫色劑相比，聚酰胺脫色效果較好，金絲小棗粗多糖(ZSP)的回收率較高，同時可去除粗多糖中的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)，故本試驗確定聚酰胺為理想的脫色劑。其脫色的最

5、佳工藝條件為：聚酰胺用量為需脫色金絲小棗粗多糖的4倍，聚酰胺柱用1倍柱體積的去離子水以1.5mL/min的流速進行洗脫。 體內(nèi)、體外免疫活性試驗均證明ZSP可增強小鼠的免疫功能，具有明顯的免疫活性。ZSP經(jīng)。DEAE-SepharoseCL-6B柱分離純化后，可得到4個組分ZSP1、ZSP2、ZSP3、ZSP4。其中由PH 5.0的醋酸鹽緩沖液洗脫可得到1個中性多糖組分．ZSP1，由0-1.5 mol/LNaCL(配制于磷酸緩沖

6、液)線性梯度洗脫得到3個酸性多糖ZSP2、ZSP3、ZSP4。ZSP1、ZSP2、ZSP3、ZSP4分別占總洗脫量的29.3％、17.6％、37.2％、15.9％，其中ZSP1、ZSP3、ZSP4中含有蛋白質(zhì)。ZSP經(jīng)DEAE-SepharoseCL-6B柱分離純化后，多糖的回收率達83.1％。結(jié)合得率及體外活性試驗結(jié)果，從中篩選出ZSP3、ZSP4作為進一步研究的組分。 ZSP3組分經(jīng)過凝膠色譜柱SepharoseCI-6B洗脫分離，

7、得到3個相對分子質(zhì)量不同組分ZSP3a、ZSP3b、ZSP3c，它們分別占總洗脫量的9.3％、7.6％、83.1％。ZSP3經(jīng)SepharoseCL-6B柱分離純化后，多糖的回收率達90.3％。體外活性試驗結(jié)果，確定ZSP3c為主要的活住成分。凝膠層析、HPLC及瓊脂糖電泳三種方法鑒定表明ZSP3c組分為均一組分。ZSP3c的旋光度[α]<,D><'25>=+131°(c 0.1；H<,2>O)，ZSP3c組分的平均相對分子量為1.6×

8、10<'5>Da。 ZSP4組分經(jīng)過凝膠柱色譜柱SepharoseCL-6B洗脫分離純化后，得到兩個相對分子質(zhì)量不同組分ZSP4a、ZSP4b，它們分別占總洗脫量的43.5％、56.5％。ZSP4經(jīng)SepharoseCL-6B柱分離純化后，多糖的回收率達85.7％。ZSP4b對體外脾淋巴細胞具有顯著的促進增殖功效。ZSP4b經(jīng)凝膠層析、HPLC方法鑒定為均一性組分，其平均相對分子量為1.4×10<'5>Da。 采用紅外傅

9、立葉轉(zhuǎn)換光譜測定了ZSP3c的酯化度。在建立果膠的酯化度(DE)與A1730/(A1730+A16301之間的線性回歸方程的基礎(chǔ)上(R<'2>=0.9862)，通過回歸計算得出了ZSP3c的酯化度為41.85％。通過分析ZSP3c的單糖組成、紅外光譜、NMR譜圖、甲基化結(jié)果，推測．ZSP3C是由←4)一α-GalpA(1→通過O-4位與→2)-α-Rhap(1→、→2,4)-α-Rhap(1→連接形成主鏈，主鏈中的-→2，4)-α-Rh

10、ap(1→通過O-4與其它糖殘基連接形成支鏈；→6)-β-Galp(1→、→5)-α-Araf(1→聚合形成半乳聚糖和阿拉伯聚糖是ZSP3C側(cè)鏈的主要組成，其支鏈通過Gal殘基和Ara殘基的O-1位與主鏈的Rha殘基的O-4相連。側(cè)鏈-6)-β-Galp(1→構(gòu)成的半乳聚糖通過O-3、O-4產(chǎn)生分支，側(cè)鏈→5)-α-Araf(1→構(gòu)成的阿拉伯聚糖通過O-3產(chǎn)生分支。通過剛果紅實驗可知，ZSP3c是一有序的三股螺旋。 ZSP4b是

11、一種蛋白聚糖，其蛋白質(zhì)含量9.7％，主要由天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、亮氨酸組成，它們占總氨基酸的62.8％；其糖含量83.5％，糖基組成分析結(jié)果表明，ZSP4b是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖組成，其摩爾比為13.8:4:3:8；其糖鍵與肽鍵以O(shè)-型糖肽鍵相結(jié)合。 同時，本論文研究了五種棗的抗氧化性。棗提取物氧化作用隨棗的品種的改變而變化，五種棗提取物抗亞油酸過氧化能力、清除DPPt{咱由基的能力以及還原力的強弱順序