榆耳(Gloeostereum incarnatum)的生藥學(xué)研究.pdf

1、本論文對榆耳(Gloeostereum incarnatum S.Ito et Imai)的真實性、有效性及安全性進行了系統(tǒng)的研究。 來源方面，榆耳(Gloeostereum incarnatum)屬擔子菌門(Basidiomycota)、層菌綱(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、皺孔菌科(Meruliaceae)、膠韌革菌屬(Gloeostereum)的真菌。干燥的子實體入藥。

2、性狀鑒定，新鮮的野生榆耳子實體耳形，膠質(zhì)，直徑2-10(13)cm，厚0-5-1cm，上表面肉粉色且密生污白色至土黃色絨毛，厚約1mm。下表面乳白色至淺橘紅色，有泡狀突起，直徑1×1-3mm，呈放射狀排列。斷面膠質(zhì)，肉粉色。氣微，昧淡。栽培榆耳的不同之處是，子實體個體大小較平均，菌蓋直徑4-8cm，菌肉較厚0.7-1.5cm。上表面絨毛較長，1.5-2mm，污白色。下表面淺橘紅色。 干燥的野生榆耳子實體極為堅硬，不易折斷，且子實

3、體體積變小，直徑2-3(5)cm。折斷面凹凸不平，有蘑菇香氣，味微淡。 水試體積變化很小，浸出液顏色為紅棕色，且在日光下呈現(xiàn)黃綠色熒光，將其晾干體積變化不大。栽培榆耳的不同之處有，干后較堅硬，子實體大，直徑4-7cm。水試體積膨大至2-5倍，浸出液顏色為淡紅棕色，晾干后呈薄片狀且很脆。 產(chǎn)地方面，野生榆耳主要分布在內(nèi)蒙古大青溝自然保護區(qū)和吉林省。其中以四平市葉赫鎮(zhèn)分布量較大，吉林省其他地區(qū)也有零星分布。栽培榆耳的產(chǎn)地則主

4、要集中在吉林省蛟河市天北鎮(zhèn)和四平市葉赫鎮(zhèn)兩地，其年總產(chǎn)量可占市場總量的70～80％。 采收期方面，野生榆耳一年采收一次，7-9月產(chǎn)生子實體；栽培榆耳一年采收兩次，春季6-7月，秋季9-10月為宜。都是平攤曬干。 顯微鑒定，榆耳子實體結(jié)構(gòu)分為上表層、中間層和子實層三部分。上表層由菌絲束構(gòu)成，中間層的菌絲富有鎖狀聯(lián)合。其中中間層存在的大量氣泡狀空隙是引起子實層表面泡狀突起的原因。野生榆耳子實層擔孢子較栽培榆耳多。 化

5、學(xué)成分方面，榆耳子實體經(jīng)干燥、粉碎后，用甲醇在50℃下提取三次，將提取液合并、濃縮并濾去沉淀，加入等倍量硅膠，水浴蒸干。再依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇索氏提取三次，提取液分別合并、濃縮，得初提物石油醚層、氯仿層、乙酸乙酯層、丙酮層、甲醇層和水層六個組分。石油醚層于4℃下靜置72小時，析出物用乙醚純化，得化合物1。氯仿層經(jīng)硅膠柱吸附，以石油醚：乙酸乙酯(12：0.5)溶劑系統(tǒng)洗脫，得到6個部分，部分3再次上硅膠柱，用石油醚：乙

6、酸乙酯(7：0.5)溶劑系統(tǒng)沈脫，得到5個部分，部分2中得到化合物2。丙酮層室溫靜置72小時，析出結(jié)晶，經(jīng)丙酮、無水乙醇和甲醇重結(jié)晶得到化合物3。所得化合物經(jīng)理化檢以、高效液相色譜、核磁共振和質(zhì)譜等分析，依次為麥角甾醇、11-α-戊烯基-2，9，16-十八碳三烯、甘露醇。其中，11-α-戊烯基-2，9，16-十八碳三烯為新化合物。 理化鑒定，榆耳中可能含有黃酮類、強心苷類、生物堿類、多糖類、揮發(fā)油類、甾醇及三萜類、氨基酸、多肽及

7、蛋白質(zhì)類化學(xué)成分。經(jīng)薄層色譜分析，單體化合物2可作為榆耳的鑒別的特征成分。此外，榆耳粉末出現(xiàn)微量升華現(xiàn)象，其生成的黃色霜花狀結(jié)晶為揮發(fā)油類物質(zhì)。 含量測定，榆耳中富含蛋白質(zhì)、脂肪、糖及多種微量元素，但采自四平市葉赫鎮(zhèn)的野生榆耳及來自蛟河市的栽培榆耳中分別鉛和砷含量超出國家標準限量。經(jīng)氣相色譜分析，兩者的六六六、滴滴涕的殘留量符合國家標準限量。 藥理作用，采用紙片法對榆耳石油醚層、氯仿層、乙酸乙酯層、丙酮層、甲醇層、水層和

8、單體化合物2進行體外抑菌率的檢測。結(jié)果表明，各個組分對大腸桿菌ATCC25923和大腸桿菌EПR￡勻表現(xiàn)出抑制作用，其中以甲醇層抑制率最高，具有量效關(guān)系。除氯仿層、丙酮層外，其它組分均對金黃色葡萄球菌O41 ermc抑制作用不顯著。丙酮層(84 mg/mL)抑制率可達73.17％，不具有量效關(guān)系。 石油醚層六個濃度和乙酸乙酯層(50 mg/mL、25mg/mL)對大腸桿菌ERcat的抑制作用均高于慶大霉素，其中以石油醚層(30.

9、mg/mL)的抑制率最高，可達160.21％，與對照組相比差異顯著；氯仿層(50 mg/mL)對大腸桿菌ERcat的抑制率達95.61％。 氯仿層對金黃色葡萄球菌S19 NMA1的抑制作用呈量效關(guān)系變化，在50 mg/mL時抑制率最高，為34.03％，與對照組相比差異極顯著；乙酸乙酯層(50 mg/mL)對金黃色葡萄球菌S19 NMA1的抑制率為39.36％，呈量效關(guān)系變化；丙酮層(84 mg/mL)對大腸桿菌ATCC25923

10、的抑制率達49.87％，與對照組相比差異極顯著。丙酮層對大腸桿菌ERcat砒在42 mg/mL和21 mg/mL時的抑制率最高，均為80.10％，與對照組相比差異顯著；甲醇層6個濃度對大腸桿菌ERcat均有明顯的抑制作用，在75 mg/mL時最高，達74.94％，但不具有量效關(guān)系；單體化合物2對大腸桿菌ATCC25923、金黃色葡萄球菌ATCC25923以及大腸桿菌EПR￡的抑菌活性明顯，其中對大腸桿菌EПR￡的抑制作用隨濃度降低而增強

11、。 單體化合物2(0.011 mg/mL)對金黃色葡萄球菌O41 ermc的抑制率可達48.78％?？偠灾芏谋獙?、甲醇層、水層和氯仿層及單體化合物2均具有良好的抑菌活性。 榆耳水層對二甲苯引起的小鼠耳腫脹有抑制作用，藥物劑量為5g/kg時抑腫率最高，可達15.86％，但與陰性組相比并無顯著性差異。 本論文首次從生藥學(xué)角度對榆耳的真實性、有效性及安全性進行系統(tǒng)研究，且對分離到的多個組分進行了抑菌活性檢測。