微直流電刺激對成骨細胞生物學性能影響的體外實驗研究.pdf

1、目的:通過對體外培養(yǎng)的成骨細胞施加不同強度的直流電刺激,探討微量直流電對成骨細胞增殖和功能的影響,為口腔修復臨床應用直流電促進牙槽骨生長提供體外細胞學依據(jù)。
　　 方法:自行設計研制體外成骨細胞直流電刺激裝置:將電源、滑動變阻器、開關、六孔培養(yǎng)板固定在一塊300mm×200mm的有機玻璃板上,并把電路串聯(lián)起來,在六孔培養(yǎng)板每孔所對應的板蓋上打兩個小孔,將鎳鈦弓絲一端與電路連接,另一端穿過培養(yǎng)板蓋浸入培養(yǎng)液內(nèi),將電路接通,于通電后

2、10min,30min,50min時用萬用表測定電路中電流的強度,經(jīng)檢測電流穩(wěn)定,絕對誤差在3μA內(nèi)。通過組織塊法原代分離培養(yǎng)新生Sprague-Dawley大鼠顱頂骨的成骨細胞,傳代培養(yǎng)至第三代進行堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)染色鑒定。純化后擴增成骨細胞,傳代培養(yǎng)至第四代或第五代備用。實驗第一部分,將細胞按1.0×105個／孔的濃度接種于六孔培養(yǎng)板中,每板接種四孔,每孔2ml。實驗分為三組,微電流對三組

3、細胞刺激的強度分別為0μA、20μA和100μA,每天刺激三次,于微電流刺激的第1天,第3天,第5天,第7天時分別收集三組細胞,用MTT法測定三組成骨細胞的數(shù)量,之后重復該實驗兩次,用Spss16.0軟件將所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析并繪制細胞增殖曲線；實驗第二部分,細胞分組及接種的方法同第一部分,之后于微直流電刺激的第1天,第3天,第5天,第7天時收集三個實驗組的成骨細胞測定其ALP活性,重復該實驗兩次,將實驗所得數(shù)據(jù)用Spss16.0軟件

4、進行統(tǒng)計學分析并繪制成骨細胞ALP活性直方圖。
　　 結果:本實驗自行研制的成骨細胞直流電刺激裝置通電過程中電流穩(wěn)定,絕對誤差在3μA內(nèi)；經(jīng)強度為20μA和100μA的直流電刺激后的細胞其增殖和對照組無統(tǒng)計學差異,三組細胞均在第3～5天時增殖速度最快,第5～7天時增殖速度減慢；經(jīng)強度為20μA和100μA的直流電刺激后的成骨細胞和對照組成骨細胞的ALP活性均有統(tǒng)計學差異；強度為20μA的直流電刺激組與強度為100μA的直流電刺激

5、組比較,成骨細胞ALP活性也有統(tǒng)計學差異(P<0.01),且直流電強度為20μA的刺激組成骨細胞ALP活性增加較明顯。
　　 結論:直流電強度為20μA和100μA時對細胞的增殖無促進作用,但可以增加成骨細胞的ALP活性,且經(jīng)20μA的直流電刺激的成骨細胞ALP活性明顯優(yōu)于經(jīng)100μA直流電刺激的成骨細胞,證明微量直流電可以促進成骨細胞的活性,特別是直流電強度為20μA時對成骨細胞活性的促進作用更為顯著,這為微量直流電用于口腔修