懸浮培養(yǎng)南方紅豆杉細(xì)胞真菌誘導(dǎo)生物學(xué)效應(yīng)的研究.pdf

1、天津大學(xué)碩士學(xué)位論文懸浮培養(yǎng)南方紅豆杉細(xì)胞真菌誘導(dǎo)生物學(xué)效應(yīng)的研究姓名：張長平申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化工指導(dǎo)教師：元英進(jìn)2000.12.1天津大學(xué)在職申請碩士學(xué)位論文 摘要A b s t r a c tT h ep h y s i o l o g ys t a t u s ，c e l lu l t r a s t r u c t u r ea n d t h es e c o n d a r y m e t a b o l i

2、s mo f s u s p e n s i o n 。c u l t u r e d T a x u s c h i n e s i s v a r ．m a i r e i i n f l u e n c e d b y f u n g a l e l i c i t o r f r o m F u s a r i u mo x y s p o r u mw h i c h w a sa d d e di n t ot h ec u

3、 l t u r e ds y s t e mi nt h el a t e re x p o n e n t i a ls t a g ew e r es t u d i e d T a x o l w a s t h e m a i n s e c o n d a r y m e t a b o l i t e i n t h e c e l l c u l t u r e s s y s t e m a n de l i c i

4、t a t i o nb yf u n g a le l i c i t o rw a s t h em a i nm e t h o d o f t h i sp a p e r ．Af e w n e w t e c h n o l o g i e so f t a x o lp r o d u c t i o ni n c l u d i n ge l i c i t i n gt h ec e l l si nf a s ks

5、y s t e ma n db i o r e a c t o rs y s t e mb yf u n g a le l i c i t o r a n df i l l i n g u pt h ef r u c t o s e a t t h es a w t et i m e ，a n di n d u c i n gt h ec e l l sb yc o c u l t u r em e t h o dw h i c ht

6、h e f u n g i w e r ei m m o b i l i z e dw e r e d e v e l o p e d ．T h eb i o l o g i c a le f f e c t s o fi r a X U S c h i n e s i sv a t ' ．m a i r e f b yd i f i e r e n tf u n g a le l i c i t o rw i t hp r e

7、 p a r a t i o nw e r er e s e a r c h e dC r u d e f u n g a l e l i c i t o r o r i g i n a t e d f r o m f u n g a l c e l l w a l l c o u l d p r o m o t et h e t a x o lp r o d u c t i o na n dr e a c h e d6 6 ．2 m

8、g ／1 f o u rd a y sa f t e re l i c i t a t i o n ．T h ep h y s i o l o g i c a ls t a t u so fc e l l s c h a n g e do b v i o u s l y ．T h em e d i u mw a sa l k a l i n i z e da n dc o n t e n to f p r o t e i ni n c

9、r e a s e dM a n y o x i d a t i v eg r o u p sw e r er e l e a s e db yo x i d a t i v eb u r s ti nas h o r tt i m ea f t e re l i c i t a t i o na n dt h ea c t i v i t yo f a l l k i n d so fe n z y m e s c h a n g e

10、 df l u c t u a n t l y T h e a c t i v i t yo f P A L w h i c hw a s a i n t e r e s t e n z y m ei n p h e n y l p r o p a n o i d m e t a b o l i s m p a t h w a yw a sp r o m o t e da n dt h ea c c u m u l a t i o no

11、 f p h e n o l i c s W a s h i g h e r ．T h ef u n g a le l i c i t o ri n f l u e n c e dt h ee e l lu l t r s t r u c t u r et o o ．T h ei n t e n s es t r u c t u r eo f e e l la g g r e g a t e st e n d e dt or e l a

12、 xa n dt h em i d d l ea r e ao fc e l la g g r e g a t e sa l t e r e dm o s to b v i o u s l yw h i c hr e s u l t e df r o mt h ei n h i b i t i o no f p r i m a r ym e t a b o l i s mb yf u n g a le l i c i t o r T h

13、 e r ew e r ee l c e t r o n —d e n s ep r e c i p i t a t el i n i n gt h et o n o p l a s ta f t e re l i c i t a t i o na n d t h ea m o u n to f e l e c t r o n ·d e n s ep l ，e c i p i t a t e i n c r e a s e d

14、f i r s t a n dd e c r e a s e df o l l o w e d ．t h em a i nc o m p o n e n to fw h i c hw e r eC a ’a n dC l _ ．w h i c hh a dr e l a t i o n s h i pw i t ht h ec e l l s i g n a lt r a n s m i s s i o n ．O v e r a l l

15、 ，t h ec e l ls t r u c t u r ew a s n o t s e r i o u s l y d a m a g e d ，b u t t h es t r u c t u r e so f c e l la g g r e g a t e sa n d t o n p l a s tc h a n g e d d r a m a t i c a l l y ．T h e a c t i v e c o m

16、p o n e n to fc r u d e e l i c i t o r w a s o l i g o s a c c h a r i d e a n d t h e n o n —a c t i v ec o m p o n e n t c o u l di n f l u e n c e dt h ea c t i v i t yo f o l i 2 0 s a c c h a r i d eb ya l t e r e

17、dt h ee x p o s u r el e v e lo f p o l y s a c c h a r i d et oc e l l s ．T h et a x o lp r o d u c t i o ni n c r e a s e dc o n t r a s tt oe l i c i t a t i o nb y c r u d ef u n g a l e l i c i t o r a n d t h e p e

18、 a k v a l u e o ft a x o l p r o d u c t i o n r e a c h e d 9 8 ．4 m g ／l 1d a y a f t e re l i c i t a t i o n A tt h es a m e t i m e ，t h ec e l l sr e s p o n d e d t ot h ef u n g a le l i c i t o rm o r eq u i c

19、k l ya n dt h ep e r i o do f e l i c i t a t i o nw a s s h o r t e d ．T h e r e s e a r c h a b o u t r e l a t i o n s h i p b e t w e e n t a x o l p r o d u c t i o n a n d c a r b o n s o u r c em e t a b o l i s m

20、s h o w e d t h a tt h ef r u c t o s ew a sb e s tc a r b o ns o u r c ef o rt a x o lb i o s y n t h e s i s ．T h ee l i c i t a t i o n p o t e n t i a l i t y o fe l i c i t o r w a sb r o u g h t i n t o f u l l p l

21、 a y b y a d d i n g t h e f r u c t o s em e d i u m i n t ot h es y s t e m ，b yw h i c h t h et a x o lp r o d u c t i o nw a sp r o m o t e dc o m p a r i n g t ot h ee l i c i t a t i o nb y f u n g a le l i c i t o

22、 ra l o n e ．t h ep e a k v a l u e o f t a x o la m o u n t r e a c h e d8 1 ．0 m g ／li nt h ef l a s k a n d7 1 ．7 m g ／l i n t h eb i o r e a c t o r ．T h e i m m o b i l i z e df u n g i c o u l d i n d u c et h e t

23、a x 0 1a c c u m u l a t i o n ，t h e h i g h e s t a m o u n t o f t a x o l r e a c h e d5 5 ．3 m g ／la f t e r4d a y s e l i c i t e db y t h e m ．D i f f e r e n te l i c i t a t i o nb yh a dd i f f e r e n tt i m e

24、c o u r s eo fe l i c i t a f i o na n dt h e s p e c i e so fm e t a b o l i t ew e r e d i f f e r e n t e i t h e r ．K e yW o r d s ：P l a n t c e l l ，S u s p e n s i o n c u l t u r e ，F(xiàn) u n g a l e l i c i t o r ,