含氧化石墨烯的暫封牙膠抗菌性能的初步研究.pdf

1、目的:初步研究摻雜有氧化石墨烯的暫封牙膠的對(duì)大腸桿菌(Escherichia coli，E.coli, ATCC25922)的抗菌性能。
　　方法:使用恒溫水浴鍋將暫封牙膠加熱到80℃，加入氧化石墨烯(grapheneoxide，GO，蘇州恒球石墨烯科技有限公司，蘇州，中國(guó))，制作成摻雜有氧化石墨烯的牙膠樣本（圓餅狀，直徑10mm，厚1mm）。按照摻雜的GO質(zhì)量分?jǐn)?shù)的不同(0％，0.5％，1％，2％，3％)，分為六組實(shí)驗(yàn)組，分別記

2、為0GO、0.5GO、1GO、2GO、3GO，而同樣形狀大小的滅菌潔凈玻片作為空白對(duì)照。挑取大腸桿菌單菌落置于10mLLB液體培養(yǎng)基中，37℃恒溫?fù)u床220rpm培養(yǎng)12h后，使用酶標(biāo)儀讀取OD550值，換算成菌液濃度，然后按照十倍梯度稀釋法經(jīng)行稀釋?zhuān)玫较胍某跏季簼舛取２捎闷桨寰溆?jì)數(shù)法和熒光顯微鏡觀察GO的摻雜對(duì)暫封牙膠抗菌性能的影響。1.平板菌落計(jì)數(shù):1.1將六組樣本（玻片、0GO、0.5GO、1GO、2GO、3GO）各一片加

3、入10mL菌液（初始濃度:1106CFU/mL），37℃恒溫?fù)u床220rpm需氧培養(yǎng)18h，稀釋106倍，取50μL均勻涂布于固體LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，做平板菌落計(jì)數(shù)，推算各組菌液終末濃度。1.2制備初始菌液濃度分別為1106CFU/mL和1105CFU/mL的菌懸液。在各初始濃度條件下，將菌液滴于各組樣本表面，菌液量為60μL/cm2，樣本置于平皿中，放入無(wú)菌濕盒中37℃需氧培養(yǎng)24h，吸取

4、培養(yǎng)后菌液，稀釋100倍，取50μL均勻涂布于LB固體培養(yǎng)基，37℃需氧培養(yǎng)24h后做平板菌落計(jì)數(shù)。2.細(xì)菌粘附/細(xì)菌活力熒光檢測(cè):設(shè)置五組(0G0、0.5GO、1GO、2GO、3GO)，牙膠浸泡于大腸桿菌菌懸液(初始濃度:1106CFU/mL)中培養(yǎng)18h，使用SYTO0/PI(LIVE/DEAD BacLightTM BacterialViability,L1304567，Life technologies，Eugene Orego

5、n，USA)，避光染色10min，熒光顯微鏡觀察樣本表面活菌/死菌的粘附。
　　結(jié)果:1.平板菌落計(jì)數(shù)法:實(shí)驗(yàn)1.1顯示將樣本置于菌液中培養(yǎng)18h后，各組菌液終末濃度無(wú)明顯差異，均達(dá)到109 CFU/mL。實(shí)驗(yàn)1.2顯示將微量菌液滴于樣本表面培養(yǎng)24h后做平板菌落計(jì)數(shù)，各牙膠組的菌落數(shù)均明顯少于玻片組，3GO的菌落數(shù)明顯少于其他牙膠組。2.熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)在SYTO9孵育下，未在菌液中培養(yǎng)的成品牙膠顯示點(diǎn)狀熒光顯像。在PI孵育下