不同時(shí)間窗介入運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)腦出血大鼠出血灶周運(yùn)動(dòng)皮層BDNF、IL-10蛋白及凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練促進(jìn)實(shí)驗(yàn)性腦出血(Intracerebral hemorrhage，ICH)大鼠運(yùn)動(dòng)能力恢復(fù)的可能機(jī)制及不同時(shí)間窗介入運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠功能可塑性及細(xì)胞凋亡的影響，為臨床腦出血患者運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練介入時(shí)間提供指導(dǎo)。
　　方法：⑴造模和干預(yù)方法:向大鼠尾狀核內(nèi)注射Ⅰ型膠原酶+肝素鈉制作腦出血模型，而對(duì)照組注入等體積生理鹽水，造模后采用神經(jīng)功能缺損評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)(Modified Neurological Severity

2、 Scores，mNSS)及microPET/CT對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。根據(jù)造模成功后運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練開(kāi)始的時(shí)間不同將運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練干預(yù)的大鼠分為24小時(shí)(24h)組、3天(3d)組、7天(7d)組，每組運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練干預(yù)3周，對(duì)照組及模型組不予任何治療。⑵觀察指標(biāo)：訓(xùn)練結(jié)束后分別對(duì)各組大鼠進(jìn)行轉(zhuǎn)棒行走評(píng)分、平衡木行走評(píng)分及網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)評(píng)分，觀察各組大鼠運(yùn)動(dòng)功能的變化；采用HE染色法觀察大鼠腦出血區(qū)域組織病理學(xué)改變，免疫組化法檢測(cè)大鼠腦出血區(qū)域周圍皮層腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)

3、因子(Brain derived neurotrophic factor，BDNF)及白介素-10(Interleukin10，IL-10)的表達(dá)；采用RT-PCR法檢測(cè)大鼠腦出血區(qū)域周圍皮層Bcl-2 mRNA及Bax mRNA的表達(dá)。⑶統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用IBM SPSS Statitistics17.0軟件進(jìn)行。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）形式表示，各組的IL-10及BDNF的平均光密度值的比較采用單因素方差分析(one

4、-way ANOVA)，組間兩兩比較采用SLD-t檢驗(yàn);各組Bax mRNA、Bcl-2 mRNA灰度值及Bcl-2 mRNA/Bax mRNA灰度比值的比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，組間兩兩比較采用SLD-t檢驗(yàn)，以p＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.01具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-10與BDNF的相關(guān)性及IL-10與Bcl-2的相關(guān)性分析均采用直線相關(guān)性分析進(jìn)行探討。
　　結(jié)果：①運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分:三項(xiàng)評(píng)分中運(yùn)

5、動(dòng)訓(xùn)練組均較模型組低，且3個(gè)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組與模型組比較差異均具有顯著意義(p＜0.05)，3個(gè)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組比較相互之間無(wú)顯著差異，對(duì)照組3項(xiàng)運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分均為正常。②HE染色:對(duì)照組大鼠右側(cè)尾狀核神經(jīng)元細(xì)胞大體形態(tài)結(jié)果完整，輪廓清晰，細(xì)胞排列整齊;模型組大鼠病灶區(qū)血腫基本消失，可見(jiàn)血腫吸收后留下的囊腔，病灶周圍組織疏松，可見(jiàn)大小不等的空泡，并伴有神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生及新生血管長(zhǎng)入;與模型組比較，24h組血腫周圍血管增生強(qiáng)于模型組，3d組及7d組病灶

6、周圍血管增生較模型組及24h組更加明顯，但病灶周圍組織疏松程度較24h組有所改善，空泡明顯減少。③BDNF蛋白的表達(dá):3個(gè)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組BDNF蛋白表達(dá)均較模型組更高，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);而3個(gè)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組中BDNF蛋白的表達(dá)以3d組最高，其次為24h組，最后為7d組，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01）。④IL-10蛋白的表達(dá):3個(gè)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組IL-10蛋白的表達(dá)均較模型組更高(p＜0.01)，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組中以3d組表

7、達(dá)最高，與24h組及7d組比較，差異具有顯著意義(p＜0.01)，但24h組與7d組比較無(wú)顯著差異(p＞0.05)。⑤Bax mRNA、Bcl-2 mRNA的表達(dá)：Bax mRNA:與模型組比較，各運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組表達(dá)增加更為明顯(p＜0.01);運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組中，7d組表達(dá)增加最為明顯(p＜0.05)，而24h組與3d組相比無(wú)差異(p＞0.05)；Bcl-2 mRNA:運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組中24h組增高不明顯，與模型組比較差異無(wú)顯著性(p＞0.05)，3

8、d組及7d組較模型組有所增加(p＜0.05)，但3個(gè)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組之間差異無(wú)顯著性(p＞0.05)；Bcl-2 mRNA/Bax rnRNA:運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組較模型組增高(p＜0.01)，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組中24h組、3d組、7d組逐漸增加，以7d組增加最為明顯，與24h組、3d組比較差異均具有顯著性(p＜0.05)，而24h組與3d組比較差異無(wú)顯著性(p＞0.05)。⑥相關(guān)性分析:IL-10與BDNF蛋白的表達(dá)呈正性相關(guān)關(guān)系，IL-10與bcl-2的表

9、達(dá)呈正性相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：⑴采用膠原酶誘導(dǎo)法向大鼠尾狀核注射Ⅰ膠原酶+肝素鈉，能成功制作腦出血?jiǎng)游锬Ｐ?；⑵運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能夠降低腦出血大鼠的運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分，促進(jìn)血腫周圍運(yùn)動(dòng)皮層IL-10蛋白及BDNF蛋白的表達(dá)；⑶運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能有效改善腦出血大鼠的運(yùn)動(dòng)功能，上調(diào)Bcl-2基因的表達(dá)、下調(diào)Bax基因的表達(dá)；⑷大鼠腦出血后3d開(kāi)始運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練較24h及7d開(kāi)始運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練更有利于出血灶周運(yùn)動(dòng)皮層BDNF蛋白及IL-10蛋白的表達(dá)；⑸大鼠腦出血后7d開(kāi)