TNFα影響有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1A2表達(dá)水平的分子機(jī)理研究.pdf

1、人類有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽(Organic Anion Transporting Polypeptides，OATP)是一類重要的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，能介導(dǎo)內(nèi)、外源性物質(zhì)的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)，在藥物的吸收、分布、代謝、消除方面起著重要的作用。OATP1A2為OATP家族中的一個(gè)成員,在大腦、小腸、肝臟、腎臟等不同組織中表達(dá)，可轉(zhuǎn)運(yùn)各種不同的藥物，影響藥物在細(xì)胞中的累積。因此，對OATP1A2表達(dá)水平的調(diào)控會影響機(jī)體對藥物的生物利用度。炎癥狀態(tài)下眾多藥物代

2、謝酶及轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)和功能發(fā)生下調(diào)，從而導(dǎo)致機(jī)體對藥物的處置過程會發(fā)生顯著改變。研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體在該狀態(tài)下會釋放一系列炎癥細(xì)胞因子，影響藥物代謝酶的表達(dá)和功能，藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體也可能受到這些細(xì)胞因子的調(diào)控。已有報(bào)道表明，TNFα可導(dǎo)致多個(gè)OATP家族成員的表達(dá)水平下降，但是具體的分子調(diào)控機(jī)制尚不清楚。本研究通過分析OATP1A2的編碼基因SLCO1A2轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)前2087 bp到轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)后73bp的片段，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)前1834bp到1

3、848 bp處有一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子NFκB的可能結(jié)合位點(diǎn)，由于TNFα對蛋白表達(dá)水平的調(diào)控往往是通過NFκB實(shí)現(xiàn)的，我們進(jìn)一步對該位點(diǎn)在TNFα調(diào)控OATP1A2過程中的作用進(jìn)行了系統(tǒng)的分析，所獲得的主要研究結(jié)果如下：
　　1．構(gòu)建獲得了帶不同長度SLCO1A2轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游片段的熒光素酶報(bào)告載體，發(fā)現(xiàn)帶有NFκB結(jié)合靶位點(diǎn)的重組子比沒有該靶位點(diǎn)的啟動(dòng)子活性低，說明NFκB的結(jié)合可能對SLCO1A2的轉(zhuǎn)錄表達(dá)有抑制作用；
　　2

4、．在對NFκB的可能結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行點(diǎn)突變后，雙熒光素酶報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)子活性部分恢復(fù)，說明該結(jié)合位點(diǎn)在SLCO1A2表達(dá)水平調(diào)控過程中發(fā)揮了作用；
　　3．通過TNFα對細(xì)胞進(jìn)行處理，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核中NFκB的含量顯著增加，表明轉(zhuǎn)錄因子NFκB參與了細(xì)胞對TNFα刺激的反應(yīng)；
　　4．TNFα中和抗體處理表達(dá)帶有NFκB可能結(jié)合位點(diǎn)熒光素酶報(bào)告載體的細(xì)胞后，啟動(dòng)子活性部分恢復(fù)，進(jìn)一步說明該位點(diǎn)參與了TNFα對OATP1A2的調(diào)