遵義及周邊地區(qū)結(jié)膜吸吮線蟲的形態(tài)學(xué)觀察和遺傳變異研究.pdf

1、目的：通過(guò)收集遵義及周邊地區(qū)結(jié)膜吸吮線蟲（Thelazia callipaeda, T.cp）人體感染標(biāo)本，對(duì)其進(jìn)行病例資料分析、形態(tài)學(xué)觀察和遺傳變異研究，初步獲得遵義及周邊地區(qū)結(jié)膜吸吮線蟲病的流行特征，了解遵義及周邊地區(qū)T.cp形態(tài)特點(diǎn)及種間和種內(nèi)進(jìn)化關(guān)系，不僅為遵義及周邊地區(qū)結(jié)膜吸吮線蟲病的防治提供依據(jù)，也為豐富T.cp基因組序列信息奠定基礎(chǔ)。
　　方法：1、遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、遵義市航天醫(yī)院眼科采集T.cp感染者成蟲標(biāo)本，獲

2、得感染者病例資料；2、光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡下觀察T.cp雌、雄蟲形態(tài)特征和超微結(jié)構(gòu)；3、HE染色法觀察T.cp雌、雄蟲橫切和縱切組織結(jié)構(gòu)特征；4、利用試劑盒提取遵義及周邊地區(qū)不同來(lái)源地蟲體DNA，分別進(jìn)行18S rRNA、cox1兩個(gè)基因的PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)；5、對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，利用ClustalX1.83進(jìn)行比對(duì)，并用MEGA7.01軟件基于最大似然法（ML）進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析。
　　結(jié)果：1、病例資料分析

3、結(jié)果顯示遵義及周邊地區(qū)T.cp人體感染病例為散發(fā)，病例近年逐漸增多，每年8～11月為高發(fā)期；感染者集中在35～60歲；女性多于男性；以農(nóng)村患者居多，其中正安縣病例最多，約1/3患者家中養(yǎng)有狗、貓。2、遵義及周邊地區(qū)人體感染T.cp形態(tài)特征與其他地區(qū)蟲體基本相同；掃描電鏡下觀察遵義及周邊地區(qū)T.cp超微結(jié)構(gòu)與其他地區(qū)蟲體存在一定差異，遵義及周邊地區(qū)T.cp口囊底部有兩塊半月形的咽門結(jié)構(gòu)，成蟲尾部腹面末端1對(duì)尾乳突上未觀察到有新月形開口。3

4、、HE染色結(jié)果顯示T.cp體表結(jié)構(gòu)為鋸齒狀皺褶，為多肌型線蟲；體壁由角皮層、皮下層和縱肌層組成，體內(nèi)有消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等。4、遵義及周邊不同地區(qū)（正安縣、綏陽(yáng)縣、桐梓縣、習(xí)水縣等）T.cp18S rRNA基因序列同源性為99％～100%；遵義及周邊地區(qū)多數(shù)樣本18S rRNA基因與日本Oita（AB538282.1）樣本同源性為100%，系統(tǒng)發(fā)育分析顯示同在一個(gè)分支。5、遵義及周邊不同地區(qū)T.cp樣本cox1基因同源性為98%～100

5、%，與羅馬尼亞（KP087796.1）、日本Oita（AB538283.1）樣本等其他地區(qū)cox1基因同源性為95%～98%。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示正安1號(hào)與日本Oita（AB538283.1）在一個(gè)分支；習(xí)水等遵義及周邊地區(qū)多數(shù)樣本的cox1基因與遵義市區(qū)2號(hào)、正安（2、3）號(hào)之間的親緣關(guān)系較近；遵義市區(qū)1號(hào)則與羅馬尼亞（KP087796.1）、塞爾維亞（KJ433983.1）樣本序列在同一分支。
　　結(jié)論：1、遵義及周邊地區(qū)T.cp