高產(chǎn)生物活性物質(zhì)的耐鹽藻篩選及降解藻毒素基因工程藍(lán)藻的研究.pdf

1、本論文對采集于多個(gè)地區(qū)的樣品進(jìn)行耐鹽藻篩選，然后針對耐鹽藻的抗菌活性和抗氧化活性展開實(shí)驗(yàn)研究，取得的結(jié)果如下:
　　1、篩選得到了耐1％、3％鹽度的40株耐鹽藻和耐8％鹽度的四株耐鹽藻并且完成了保種工作，豐富了實(shí)驗(yàn)室耐鹽微藻藻種資源。同時(shí)，測定了4-9號(hào)耐鹽藻株分別在0％和3％鹽度下的生長曲線，確定了不同耐鹽藻的相對適宜生長鹽度，并進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定。此外，測定了耐受8％鹽度的四株耐鹽藻的生長曲線，且鑒定這四株藻均為杜氏藻，同時(shí)

2、基于ITS序列分析構(gòu)建了它們之間的系統(tǒng)發(fā)育樹。
　　2、對耐鹽藻（編號(hào)1-16）進(jìn)行抑菌活性研究。其中，9號(hào)藻株的乙醇提取物對E.coli CMCC44102和Staphylococcus aureus抑菌活性最高(抑菌圈直徑分別為14.0 mm和12.0 mm);16號(hào)藻株的乙醇提取物對Fusarium moniliforme、Alternaria alternata、Ascosphaera apis的相對抑制率最高（分別為7.

3、84％、14.81％、14.52％），11號(hào)藻株的乙醇提取物對Fusarfum tricinctum的相對抑制率最高(10.64％)。選取抑菌活性相對較好的藻株進(jìn)行脂肪酸分析，發(fā)現(xiàn)藻株中不飽和脂肪酸種類占比主要集中在亞油酸、亞麻酸和十六碳（二）烯酸。
　　3、對耐鹽藻進(jìn)行抗氧化活性研究，分別測定了總酚、總黃酮及DPPH、ABTS自由基清除活性。結(jié)果顯示，16號(hào)藻株的甲醇提取物總酚含量最高(8.74 mg GAE·(g d.wt)-

4、1），乙醇提取物總黃酮含量最高(19.22 mg QE·(gd.wt)-1);10號(hào)藻株甲醇提取物具有最高的DPPH自由基清除活性(78.23％)，16號(hào)藻株的甲醇提取物具有最高的ABTS自由基清除活性(93.84％)。
　　此外，本論文成功構(gòu)建了可降解藻毒素的基因工程藻株6803-A+，并研究其藻毒素降解活性，得到的結(jié)果為:
　　1、基因工程藻株6803-A+的培養(yǎng)基中未檢測到MlrA酶活性，但是在其細(xì)胞裂解液中檢測到了M

5、lrA酶活性(0.108 U·mL-1);超聲次數(shù)對藻株6803-A+裂解液MlrA酶活有很大影響，超聲次數(shù)越多，細(xì)胞裂解越充分，當(dāng)超聲15次時(shí)MlrA酶活性最高(0.149 U·mL-1)，是超聲3次時(shí)酶活性的24.83倍。
　　2、培養(yǎng)菌株至OD=1，測定得到基因工程藻株6803-A+的最大MlrA酶活性為0.108 U·mL-1，基因工程菌株BL21(DE3)-pGEX-mlrA的最大MlrA酶活性為2.985 U·mL-1