南藥雞骨草的生藥學研究及抗肝纖維化活性評價.pdf

1、目的:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)等因素所致的肝損傷進一步發(fā)展會產生肝纖維化，而肝纖維化的控制與預防對慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)的治療具有至關重要的作用。雞骨草是豆科相思子屬植物廣州相思子(Abruscantoniensis Hance，AC)的干燥全草，《中國藥典》收載，具有利濕退黃、清熱解毒、疏肝止痛的功效。臨床上用于治療肝硬化腹水、急慢性肝炎具有較好療效。我們前期研

2、究也證實雞骨草具有抗肝纖維化作用。然而其物質基礎及作用機制尚不清楚。為了科學地評價雞骨草資源及質量，闡明其抗肝纖維化的物質基礎，本課題對雞骨草和毛雞骨草進行生藥學比較研究及其抗肝纖維化活性的系統(tǒng)評價，為雞骨草的合理開發(fā)利用提供科學依據(jù)。
　　方法:
　　1、通過搜索中國植物志、中國數(shù)字植物標本館、維普、萬方、Pubmed等數(shù)據(jù)庫，結合野外調查與市場調查，對雞骨草的資源分布進行調查，對其生藥學特性進行研究。
　　2、通過

3、制作雞骨草和毛雞骨草莖和葉片的石蠟切片，用顯微鏡觀察二者的組織構造區(qū)別。
　　3、對雞骨草和毛雞骨草的揮發(fā)油和脂肪酸的成分進行比較，并對雞骨草的乙酸乙酯和正丁醇部位進行LC-MS分析。
　　4、應用Discovery Studio3.0軟件中的分子對接模塊和ADMET（藥物的吸收、分布、代謝、排泄和毒性）模塊對相思子屬的243個已知化合物進行活性預測和成藥性評價。
　　5、采用HSC-T6細胞篩選雞骨草的抗肝纖維化活性

4、成分;采用昆明小鼠(Kunmingmice，KM)制作免疫性肝纖維化模型進行雞骨草預防和治療肝纖維化活性成分的體內篩選。
　　結果:
　　1、調查研究表明雞骨草主要分布在我國廣西和廣東地區(qū)，湖南、海南和香港也有分布，喜高溫，不耐寒，耐旱怕澇。同屬植物我國有四種。習用的主要有雞骨草與毛雞骨草兩種。
　　2、通過雞骨草與毛雞骨草的形態(tài)鑒定和顯微鑒定，基于其小葉、外形、株重以及次生木質部導管和葉片的柵欄組織特征，建立雞骨草與

5、毛雞骨草的特征檢索表，可對兩者進行正確區(qū)分。
　　3、通過比較雞骨草和毛雞骨草的揮發(fā)油成分，二者主要成分中除了（±）-α-乙酸松油酯（24.30％和20.07％）為共有成分外，雞骨草藥材中含量較高的有丁香酚甲醚(22.22％)、茴香腦(14.08％)、鄰乙酰苯酚(3.07％)、芍藥醇(2.41％)等成分，而毛雞骨草藥材中還有含量較高的α-乙基-己酸(25.84％)。
　　4、通過比較雞骨草與毛雞骨草脂肪酸的成分，二者共有成分

6、為棕櫚酸(27.12％和19.31％)、十八烷酸（5.22％和9.64％）、十五烷酸（0.22％和0.34％），此外，從主要成分來看雞骨草中含有亞油酸(16.89％)和豆甾烷醇(1.68％)，而毛雞骨草中則含有豆甾醇(6.81％)和菜油甾醇(1.34％)。
　　5、通過分析雞骨草乙酸乙酯和正丁醇萃取部位的LC-MS，分別鑒定出了36個和26個化合物，其中乙酸乙酯萃取部位的主要成分為有機酸類和黃酮類，并存在許多其他類成分。而正丁醇萃

7、取部位則存在三萜皂苷類、黃酮類、生物堿類以及糖類成分，且都具有一定的藥理活性。
　　6、通過分子對接和ADMET性質預測，提示雞骨草中的三萜皂苷類和有機酸類成分與肝病有關受體對接分數(shù)較高，且ADMET性質預測中具有較好的水溶性、較好的人體腸道吸收性、無肝毒性、無細胞色素P4502D6的抑制性、良好的血腦屏障通透性以及較低的血漿蛋白結合率，而生物堿的預測表明具有肝毒性、細胞色素P4502D6的抑制性以及較差的血腦屏障透通性，在開發(fā)研

8、究時應注意。
　　7、體外抗肝纖維化實驗結果表明，雞骨草石油醚萃取部位對HSC-T6細胞具有最佳的抑制作用(P＜0.001)，抑制率達87％。
　　8、體內通過牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)-小鼠免疫性肝纖維化模型實驗表明，雞骨草正丁醇萃取部位和石油醚萃取部位分別對預防和治療肝纖維化疾病具有較好的療效，與模型組相比，二者均能明顯地降低血清中谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶的值，同時能顯著性地降低肝組織

9、中羥脯氨酸、單胺氧化酶、層黏蛋白、透明質酸、Ⅲ型前膠原、Ⅳ型膠原、轉化生長因子β1的值（P＜0.05）。
　　9、體外抗肝纖維化實驗結果表明，亞油酸等有機酸類成分對HSC-T6細胞具有最佳的抑制作用(P＜0.001)，抑制率達90％。
　　結論:
　　1、通過雞骨草資源調查明確了雞骨草資源主要分布在兩廣地區(qū)，主要的混淆品是毛雞骨草、相思子、小葉三點金和小葉黑面神。
　　2、通過雞骨草和毛雞骨草的形態(tài)鑒定和顯微鑒定