PARP-1活化和AIF核轉(zhuǎn)位在新生大鼠HIBD中的作用及參附注射液對其的保護(hù)作用.pdf

1、目的: 研究新生大鼠腦缺氧缺血后聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶-1（PARP-1）和凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）在腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞線粒體、胞質(zhì)、胞核中的動(dòng)態(tài)變化，進(jìn)而探討PARP-1誘導(dǎo)AIF核轉(zhuǎn)位的機(jī)制和AIF在缺氧缺血性腦損傷大鼠中的作用，同時(shí)研究參附注射液能否通過PARP-1---AIF途徑起到對新生大鼠的保護(hù)作用。
　　 方法: 新生7d SD大鼠隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組（S）、生理鹽水對照組（C）、參附治療組（SF）。每一組按照

2、觀測的時(shí)間點(diǎn)不同分為3h、6h、12h、24h、3d、7d六個(gè)亞組，每個(gè)亞組8只。用Rice法制備新生大鼠HIBD模型。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)將大鼠斷頭取右側(cè)皮層腦組織勻漿行亞細(xì)胞器分離，用Western blot 方法測不同時(shí)間點(diǎn)亞細(xì)胞器中AIF、PARP-1動(dòng)態(tài)變化；用RT-PCR的方法檢測腦皮層組織AIFmRNA；用TUNEL染色法檢測相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)光鏡下腦皮層組織的凋亡細(xì)胞。
　　 結(jié)果:
　　 （1）AIF: S組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)

3、的線粒體內(nèi)均有表達(dá)，且沒有量的變化，在胞漿內(nèi)有少量的表達(dá)而在胞核內(nèi)沒有表達(dá)；C組線粒體內(nèi)AIF的表達(dá)3h開始逐漸增加，6h達(dá)到高峰后開始逐漸下降，7d時(shí)與S組比較沒有差異（P>0.05）。AIF在胞漿胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)位從HI后3h開始增加，24h達(dá)到高峰后開始逐漸下降。在胞核中各個(gè)時(shí)間點(diǎn)AIF的表達(dá)量均明顯高于胞漿，但低于線粒體；SF組線粒體、胞漿和胞核中的表達(dá)在3h、6h、12h與對照組比較沒有差異（P>0.05），線粒體內(nèi)AIF表達(dá)在24

4、h、3d、7d SF組較C組有所增加（P<0.05），而24h胞漿和胞核中的AIF表達(dá)較C組減少,以后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有不同程度的降低（P<0.05）。
　　 （2）PARP-1：本研究僅發(fā)現(xiàn)在胞核中有少量的表達(dá)，但在胞漿、線粒體內(nèi)無表達(dá)。
　　 （3）AIFmRNA：S組各時(shí)間點(diǎn)僅有少量的表達(dá)，C組從HI后3h 開始增加，24h達(dá)到高峰后下降，SF組各時(shí)間點(diǎn)均較C組減少（P<0.05）。
　　 （4）HI后3h C

5、 組和SF組即發(fā)現(xiàn)結(jié)扎側(cè)腦皮層有少量的凋亡細(xì)胞，隨著缺氧缺血時(shí)間的延長，凋亡細(xì)胞逐漸增多，24h達(dá)到高峰后下降； SF組在HI后24h、3d、7d均明顯低于C 組（P<0.05）。
　　 結(jié)論: HI后腦皮層組織細(xì)胞中AIF在線粒體和胞漿胞核中表達(dá)均是增加的，胞漿胞核中AIF表達(dá)高峰滯后于線粒體；HI后腦皮層組織細(xì)胞的凋亡明顯增加，且與AIF的核轉(zhuǎn)位和基因轉(zhuǎn)錄在時(shí)間上吻合；PARP-1不能轉(zhuǎn)位到胞漿和線粒體內(nèi)直接誘導(dǎo)AIF的核轉(zhuǎn)