用于檢測活性氧自由基的熒光探針研制及其分析應用.pdf

1、生物新陳代謝過程中產生眾多的活性氧(Reactive Oxygen Species，ROS)，包括超氧陰離子自由基(O<,2>)、過氧化氫(H<,2>O<,2>)、羥基自由基(OH)、一氧化氮(NO)、過氧亞硝基(ONOO<'->)等，這些自由基與癌癥、機體炎癥、組織過氧化、蛋白質交聯(lián)變性、DNA損傷和信號傳導等有直接的關系，被統(tǒng)一稱為對機體的氧化脅迫。 然而，由于生物體內活性氧的壽命非常短，導致通常情況下穩(wěn)態(tài)濃度極低，而短壽

2、命和低濃度意味著活性氧的測定非常困難。目前測定自由基的方法主要有電了自旋共振法(ESR)、高效液相色譜法(HPLC)、化學發(fā)光法(CL)等，相比于以上方法，熒光法結合共聚焦顯微成像技術和微區(qū)光譜檢測技術，是唯一使活細胞和組織內的ROS“實時、可見、定量”的檢測方法，，而在600-1000nm的近紅外光區(qū)，生物基體光吸收或熒光強度很小，且致密介質(如組織)的光散射大大降低，激發(fā)光的穿透性更大，因而自發(fā)熒光的背景干擾大大降低，且能量較低減少

3、光照對細胞的損傷，所以近紅外熒光探針擁有良好的發(fā)展前景。因此，設計合成選擇性好，靈敏度高，具有生物兼容性的紅外、近紅外熒光探針用來檢測活細胞和組織內的活性氧是生命化學學科發(fā)展中具有挑戰(zhàn)性的前沿課題之一。 本論文基于活性氧引起探針熒光增強的機理，開展了三方面的工作。 (一)設計合成了新型近紅外順磁性自旋標記氮氧自由基熒光探針Cy.7.TEMPO，基于非氧化機理對羥基自由基進行檢測，并利用激光共聚焦成像技術對細胞內羥基自由基