DNT細(xì)胞在胰腺癌組織中表達(dá)的臨床研究及其生物學(xué)特性.pdf

1、胰腺癌是消化道腫瘤中惡性程度較高的一種,由于其易發(fā)生早期局部浸潤(rùn)(侵犯周?chē)馨徒Y(jié)、血管、神經(jīng)等)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,且由于其發(fā)生部位特殊,往往確診已晚期,胰腺癌已經(jīng)成為威脅人類(lèi)健康的殺手。在發(fā)達(dá)國(guó)家,胰腺癌是主要的導(dǎo)致死亡的腫瘤之一。據(jù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)僅有約10％的胰腺癌患者在確診時(shí)有手術(shù)切除的機(jī)會(huì),而這些經(jīng)手術(shù)治療的患者1年生存率和5年生存率小于5%和1%。
　　近年來(lái)一些腫瘤學(xué)家開(kāi)始關(guān)注一種新的治療癌癥的方法:過(guò)繼免疫療法。其中CD4-CD8

2、-雙陰T細(xì)胞是新近發(fā)現(xiàn)的一中特殊類(lèi)型的T淋巴細(xì)胞,其在外周血中占總淋巴細(xì)胞的1%-5%。人們通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)DNT細(xì)胞可以通過(guò)各種途徑殺傷于抗原特定細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞,使得免疫治療成為研究熱點(diǎn)。DNT細(xì)胞在免疫調(diào)節(jié)、免疫抑制、自身免疫性以及抗宿主反應(yīng)、HIV感染以及抗腫瘤方面有重要作用。本研究主要通過(guò)免疫組化技術(shù)檢測(cè)胰腺癌患者癌組織中DNT細(xì)胞含量的變化情況,并在體外分離擴(kuò)增出做夠數(shù)量的DNT細(xì)胞,研究其對(duì)人胰腺癌細(xì)胞系Panc-1的影響。

3、r>　　目的:
　　本研究采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)胰腺癌患者與對(duì)照組胰腺組織中CD3+CD4-CD8-CD56-CD57-雙陰T細(xì)胞(DNT)表達(dá)情況。探討CD3+CD4-CD8-CD56-CD57-雙陰T細(xì)胞的體外擴(kuò)增技術(shù),分析其對(duì)人胰腺癌細(xì)胞系Panc-1的影響。
　　方法:
　　(1)免疫組化技術(shù)檢測(cè)胰腺癌患者與對(duì)照組胰腺組織中CD3+CD4-CD8-CD56-CD57-雙陰T細(xì)胞(DNT)的表達(dá)情況;
　　(

4、2)DNT細(xì)胞培養(yǎng):應(yīng)用抗體吸附法擴(kuò)增外周血雙陰T細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)所得細(xì)胞表型;
　　(3)DNT細(xì)胞對(duì)人胰腺癌細(xì)胞Panc-1細(xì)胞的增值的影響:MTT法檢測(cè)DNT細(xì)胞對(duì)胰腺癌細(xì)胞Panc-1的增殖的影響,
　　(4)裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn):通過(guò)對(duì)裸鼠皮下種植人胰腺癌細(xì)胞Panc-1產(chǎn)生移植瘤,觀(guān)察DNT細(xì)胞對(duì)裸鼠荷瘤的生長(zhǎng)曲線(xiàn)和抑瘤率的影響。
　　結(jié)果
　　(1)胰腺癌癌旁組織中DNT細(xì)胞高表達(dá),而健康對(duì)照組胰腺組織

5、中DNT細(xì)胞不表達(dá)。高、中分化型胰腺癌組織中DNT細(xì)胞的含量明顯高于低分化型患者。
　　(2)每10ml外周血經(jīng)抗體吸附法,培養(yǎng)12天左右,所得細(xì)胞數(shù)量為2.0×106個(gè)以上,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞純度逐漸提高,流式細(xì)胞儀檢測(cè)所得細(xì)胞表型為CD3+CD4-CD8-CD56-CD57-。
　　(3)MTT檢測(cè)當(dāng)DNT細(xì)胞數(shù)與胰腺癌細(xì)胞Panc-1數(shù)量之比為1:1時(shí),胰腺癌細(xì)胞的增殖明顯減弱(P=0.000,P<0.05);當(dāng)