兔出血熱病毒重組疫苗的構(gòu)建與篩選.pdf

1、兔出血癥是由兔出血癥病毒所致的一種急性、高致死性傳染疾病,以全身實(shí)質(zhì)器官水腫、出血性變化及淤血為主要特征。該病首先于1984年在我國爆發(fā),隨后迅速蔓延到世界各地,感染兔出血熱病毒RHDV的兔子常在48-72小時(shí)內(nèi)死亡。RHDV病毒粒子呈球形,無囊膜,直徑32-36nm,20面體對(duì)稱。其基因組為單股正鏈RNA,全長7437bp,有兩個(gè)開放閱讀框。ORF1占整個(gè)基因組的94％,編碼一個(gè)進(jìn)一步分解為結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白的多聚蛋白。其中衣殼蛋白

2、為主要的結(jié)構(gòu)蛋白(5305-704lnt),稱為VP60。
　　 兔黏液瘤病(Myxomatosis)和RHD一樣是嚴(yán)重影響歐洲兔群的兩大疾病。其中MV為專一感染兔的痘病毒。該病毒屬于痘病毒科,野兔痘病毒屬,痘病毒含有能夠被真核細(xì)胞識(shí)別的啟動(dòng)子,這些啟動(dòng)子不但可以啟動(dòng)基因工程中常用的一些標(biāo)記基因的表達(dá),而且還能夠引發(fā)克隆的外源基因的表達(dá)。痘病毒經(jīng)過改建后,可以發(fā)展成為表達(dá)外源基因的分子載體。
　　 本研究用兔粘液瘤病毒作

3、為重組病毒載體,以粘液瘤病毒的非必須基因MST3N基因?yàn)橥粗亟M位點(diǎn),通過同源重組,制備能同時(shí)抵抗兔出血熱病毒和粘液瘤病毒兩種病毒的重組疫苗。這種重組疫苗表達(dá)兔出血熱病毒RHDV的主要衣殼蛋白VP60和篩選標(biāo)記GFP。通過篩選標(biāo)記GFP在熒光下篩選重組病毒,經(jīng)過幾輪空斑篩選,分離純化重組病毒。與野生型病毒相比,MST3N基因被敲斷了的重組病毒在RK13細(xì)胞中的復(fù)制并未受到影響。皮下注射重組病毒疫苗后,被注射兔子血清內(nèi)產(chǎn)生了RHDV抗體,