棉花農(nóng)桿菌活體轉(zhuǎn)化方法及其在棉籽品質(zhì)改良上的應用.pdf

1、棉花是我國重要的經(jīng)濟作物。作為一種優(yōu)質(zhì)的天然纖維，棉纖維是紡織業(yè)的重要原料。除此以外，棉花也是一種重要的油料作物，棉籽中含有大量的蛋白質(zhì)和脂肪，這使得棉籽成為生產(chǎn)蛋白質(zhì)和食用油等的潛在資源，棉籽的營養(yǎng)品質(zhì)也逐漸成為研究的熱點，改良和利用棉籽的營養(yǎng)品質(zhì)性狀是棉花育種的重要目標。本研究以高油基因VgDGAT1a為目的基因，以具有自主知識產(chǎn)權的抗草甘膦基因(EPSPS-G6)為植物篩選標記基因，通過農(nóng)桿菌活體轉(zhuǎn)化技術將表達載體轉(zhuǎn)入受體棉花植株

2、-中棉所49中，獲得轉(zhuǎn)基因植株，并經(jīng)過一系列的自交純化，獲得純化轉(zhuǎn)基因種質(zhì)系-T3種子，采用無損分析技術-近紅外光譜分析技術對轉(zhuǎn)基因種質(zhì)系進行營養(yǎng)品質(zhì)的分析，評價轉(zhuǎn)VgDGAT1a棉花種質(zhì)系的利用價值。主要研究結果如下:
　　1.利用已經(jīng)構建的帶有VgDGAT1a目的基因和植物篩選標記（抗潮霉素基因-hyp）的植物表達載體pCAMBIA1301，用具有自主知識產(chǎn)權的草甘膦抗性基因EPSPS-G6替代表達載體自帶的抗潮霉素基因hyp

3、，重新構建表達載體。
　　2.將重組質(zhì)粒pCAMBIA1301-VgDGAT1a+EPSPS-G6轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105中，利用農(nóng)桿菌活體轉(zhuǎn)化技術將其轉(zhuǎn)入棉花植株中，收獲轉(zhuǎn)化種子共1268 g。
　　3.用20 mmol/l的草甘膦對擬轉(zhuǎn)化幼苗進行篩選，獲得轉(zhuǎn)基因植株共125株，自交后獲得T1種子，繼續(xù)進行草甘膦篩選和嚴格自交，并經(jīng)PCR鑒定和Southern blot檢測確定，最終獲得51個純合轉(zhuǎn)VgDGAT1a基因的種質(zhì)