骨肉瘤中ATF3基因調(diào)節(jié)P53鞠躬小分子化合物RITA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、中圖分類號(hào)UDC61O碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼10533骨肉瘤中ATF3基因調(diào)節(jié)P53靶向小分子化合物RITA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究ThestudyofP53targetedsmallmolecularcompoundsRITAinducedapoptosisregulatedbyATF3inosteosarcoma作者姓名：李驍寧學(xué)科專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)研究方向：外科學(xué)學(xué)院(系、所)：湘雅二醫(yī)院指導(dǎo)教師：王萬(wàn)春教授答辯委員會(huì)主噼中南大學(xué)二O一

2、四年五月骨肉瘤中ATF3基因調(diào)節(jié)P53靶向小分子化合物RITA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究摘要目的：骨肉瘤(osteosarcoma)是較常見的發(fā)生在20歲以下的青少年或兒童的一種惡性骨腫瘤，在小兒骨惡性腫瘤中最多見，約為小兒腫瘤的5％。骨肉瘤起源于間葉組織，惡性程度高，侵襲性強(qiáng)，較早出現(xiàn)肺部轉(zhuǎn)移，因而骨肉瘤患者的預(yù)后非常差，患者生存率很低，截肢后5年存活率僅為515％。現(xiàn)如今分子靶向治療的出現(xiàn)，給骨肉瘤患者帶來(lái)了新的福音。應(yīng)激反應(yīng)基因AT

3、F3是P53的一個(gè)重要靶基因，在多種癌癥中具有抑癌基因的作用，ATF3基因能調(diào)控細(xì)胞死亡，細(xì)胞周期。RITA(reactivationofp53andinductionoftumorcellapoptosis)是一種P53靶向小分子抗癌化合物，誘導(dǎo)P53及其靶基因表達(dá)，在許多細(xì)胞系中導(dǎo)致大量細(xì)胞凋亡。本課題研究了ATF3基因在抗癌化合物RITA誘導(dǎo)的骨肉瘤細(xì)胞(U20S)凋亡中起到的調(diào)節(jié)作用。方法：不同濃度及時(shí)間長(zhǎng)度RITA刺激骨肉瘤細(xì)

4、胞系(U20S)，通過Westerblot及熒光定量PCR測(cè)定ATF3蛋白及mRNA表達(dá)水平。將ATF3沉默載體轉(zhuǎn)入骨肉瘤細(xì)胞系(U20S)，建立穩(wěn)定細(xì)胞系，RITA處理細(xì)胞，用MTT、流氏細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡水平，通過Westerblot及熒光定量PCR測(cè)定ATF3下游凋亡調(diào)控基因DR5、PUMA的蛋白及mRNA水平。結(jié)果：1、用02uMRITA處理U20S細(xì)胞后，取0，2，4，8，12，24小時(shí)收取蛋白及mRNA后，用westernb