我國(guó)云南?。ǖ幔┪鞅钡貐^(qū)蟲(chóng)媒病毒調(diào)查.pdf

1、本文為了解云南?。ǖ幔┪鞅钡貐^(qū)蚊蟲(chóng)及蟲(chóng)媒病毒的種類及分布情況，為當(dāng)?shù)叵x(chóng)媒病毒病的預(yù)防控制提供理論依據(jù)，2005、2006年7～9月份，沿瀾滄江、金沙江、怒江沿岸，自南向北在不同的緯度及海拔采集蚊蟲(chóng)標(biāo)本并進(jìn)行病毒分離鑒定，這是首次對(duì)該地區(qū)蟲(chóng)媒病毒的種類及分布進(jìn)行調(diào)查。 研究?jī)?nèi)容： 標(biāo)本采集：在滇西北地區(qū)，沿怒江、瀾滄江、金沙江沿岸的6州(市)12個(gè)縣59個(gè)地點(diǎn)，于夜間在人房和畜圈采集蚊蟲(chóng)標(biāo)本，分類后按蚊種進(jìn)行分裝，立即凍存

2、于液氮中直至用于病毒分離。采集地點(diǎn)的范圍從北緯24°00′到29°00°′，海拔在900米至3280米之間，采集行程約1200公里。兩年共采集蚊蟲(chóng)54879只，包括8種庫(kù)蚊、5種按蚊、2種伊蚊和1種阿蚊，共4屬16種，以三帶喙庫(kù)蚊、中華按蚊、騷擾阿蚊和致倦庫(kù)蚊為主。通過(guò)標(biāo)本采集發(fā)現(xiàn)，隨著采集地點(diǎn)緯度的升高，三帶喙庫(kù)蚊的數(shù)量先升高后降低，在26°30′達(dá)到最高，隨后又逐漸下降，隨緯度的升高呈單峰分布，而其他蚊種的數(shù)量都沒(méi)有明顯的隨緯度改變

3、的趨勢(shì)。相反，蚊蟲(chóng)總數(shù)量以及三帶喙庫(kù)蚊、中華按蚊等優(yōu)勢(shì)蚊種的數(shù)量都與海拔高度呈負(fù)相關(guān)，蚊蟲(chóng)數(shù)量在海拔1500米達(dá)到高峰，隨后迅速下降。此外還發(fā)現(xiàn)，騷擾阿蚊的數(shù)量為3706只，僅次于三帶喙庫(kù)蚊(35469只)和中華按蚊(9665只)，是該地區(qū)的優(yōu)勢(shì)蚊種之一，與云南省中南部地區(qū)不同。病毒分離：按照從每個(gè)地點(diǎn)的標(biāo)本中選擇二分之一或三分之一，并盡量覆蓋所有蚊種的原則，最終研磨了281批21195只，占全部標(biāo)本的38.6％(21195/54879

4、)。用于病毒分離的標(biāo)本涵蓋了采樣范圍內(nèi)的每個(gè)緯度和海拔，包括采集標(biāo)本的12個(gè)縣53個(gè)地點(diǎn)，4屬16種蚊蟲(chóng)。采用組織培養(yǎng)的方法，將蚊蟲(chóng)研磨處理后的離心上清接種C6/36細(xì)胞，再用病變C6/36細(xì)胞上清接種BHK21細(xì)胞。經(jīng)過(guò)連續(xù)傳代，共獲得49株可引起細(xì)胞規(guī)律病變的分離物。49株分離物分別分離自三帶喙庫(kù)蚊、中華按蚊、騷擾阿蚊、致倦庫(kù)蚊、昆明按蚊等，其中從三帶喙庫(kù)蚊中分離的毒株最多，達(dá)29株，從中華按蚊和騷擾阿蚊中各分離8株和5株。從病毒分

5、離物的空間分布看，緯度對(duì)病毒分離率沒(méi)有明顯影響，但分離物數(shù)量隨海拔呈先升高后降低的趨勢(shì)，海拔越高，分離物數(shù)量越少。在海拔1500～2000米之間分離到的毒株最多，有29株，超過(guò)陽(yáng)性分離物總數(shù)的一半，海拔3000米以上則沒(méi)有分離到病毒，與蚊蟲(chóng)數(shù)量的分布趨勢(shì)相同。 病毒鑒定：49株分離物通過(guò)形態(tài)學(xué)、血清學(xué)、分子生物學(xué)方法的鑒定，共得到乙腦病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)13株、蓋塔病毒(Geta

6、h virus，GETV)5株、Kadipiro病毒(Kadipirovirus，KDV)5株、版納病毒(Banna virus，BAv)3株和濃核病毒(Densovirus，DNV)7株，還有16個(gè)分離物需要進(jìn)一步鑒定。 ◆ 13株JEV中有12株分離自三帶喙庫(kù)蚊，說(shuō)明該蚊種在滇西北地區(qū)同樣是當(dāng)?shù)匾夷X病毒的主要媒介，與緯度較低的云南南部地區(qū)調(diào)查結(jié)果一致。將13株JEV與2002年、2004年云南中南部大理州和西雙版納州分離的1

7、2株JEV共同進(jìn)行分子特征研究，結(jié)果顯示，云南省中南部的乙腦分離株屬于基因Ⅲ型，而西北部地區(qū)的乙腦病毒株則分屬于基因Ⅰ型和Ⅲ型，且以Ⅰ型為主。兩個(gè)基因型別毒株的E基因核苷酸差異為15.6％，E蛋白氨基酸同源性最高為98.2％，同型毒株間的同源性為94～100％。滇西北的乙腦分離株3’非編碼區(qū)存在兩種與基因型別有關(guān)的缺失模式，基因Ⅲ型的毒株在終止密碼子TAG之后有3處缺失，而基因Ⅰ型只有1處1個(gè)核苷酸的缺失。 ◆ GETV：對(duì)5個(gè)

8、GETV的3，非編碼區(qū)進(jìn)行序列分析發(fā)現(xiàn)，云南分離株與我國(guó)河北、海南、臺(tái)灣等地GETV分離株具有相同的序列特征，在第45～55位存在一段核苷酸缺失，但其末端保守序列與其他國(guó)家和地區(qū)的GETV株完全相同。其中1株(YN0540)的全基因序列與我國(guó)其他地區(qū)GETV分離株的同源性非常高，核苷酸和氨基酸序列的同源性分別是96.9～99.1％和97.4～99-4％。 ◆ BAV：從三帶喙庫(kù)蚊和中華按蚊中分離到3株BAV，通過(guò)測(cè)定3個(gè)分離株第

9、12片段編碼區(qū)序列，發(fā)現(xiàn)其中1株的編碼區(qū)存在1個(gè)核苷酸缺失，長(zhǎng)623nt，另外2株與我國(guó)北京分離株BJ95-75及印尼分離株J：KT-6423、JKT-7043、JKT-6969的編碼區(qū)長(zhǎng)度相同，均為624nt。印尼株的終止密碼子為T(mén)GA，而我國(guó)分離株均為T(mén)AA；兩國(guó)分離株在第25、26、46、102位等多個(gè)位點(diǎn)存在相同的差異位點(diǎn)，顯示了BAV第12節(jié)段基因存在地域差異。 ◆ KDV：首次從云南省分離到5株KDV，也是我國(guó)首次分

10、離到該病毒。對(duì)其中1株第12片段進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定并推導(dǎo)氨基酸序列，與目前國(guó)際上唯一一株KDV-JKT-7075進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)，我國(guó)分離株第12片段全長(zhǎng)756nt，在非編碼區(qū)存在2個(gè)核苷酸插入，但5’端和3’端保守序列與JKT-7075完全相同；編碼區(qū)長(zhǎng)度相同，均編碼190個(gè)氨基酸，氨基酸序列同源性為96.32％。 ◆ DNV：從三帶喙庫(kù)蚊、致倦庫(kù)蚊、騷擾阿蚊等蚊種中分離到7株DNV。 ◆此外，從2005年廣西省靖西縣乙腦

11、流行區(qū)采集的14批980只三帶喙庫(kù)蚊中分離并鑒定了3株基因I型乙腦病毒。3個(gè)分離株的E蛋白氨基酸序列和疫苗株SA-14-14-2相比，同源性為96.8％～97％，3’UTR區(qū)段的缺失情況與云南省的基因Ⅰ型分離株相同，在TAG之后存在3處缺失。 研究意義及創(chuàng)新性： 首次在我國(guó)滇西北地區(qū)進(jìn)行蚊蟲(chóng)種類及蟲(chóng)媒病毒調(diào)查，沿怒江、瀾滄江和金沙江三條大江，在不同緯度(24°00′～29°00′)和海拔(900米～3280米)的斷面區(qū)域

12、內(nèi)立體采集蚊蟲(chóng)標(biāo)本并進(jìn)行蟲(chóng)媒病毒分離鑒定。了解了滇西北地區(qū)蚊蟲(chóng)種類和分布特征，尤其是“三江并流”區(qū)域蚊蟲(chóng)分布特點(diǎn)。從蚊蟲(chóng)標(biāo)本中分離到了JEV、GETV、BAV、KDV和DNV共5種蟲(chóng)媒病毒，不但豐富了我國(guó)和云南省蟲(chóng)媒病毒的種類，而且為了解當(dāng)?shù)貍魅静〔∫蚣安《拘詡魅静〉念A(yù)防控制提供了極為重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，將產(chǎn)生極大的社會(huì)效益。 本研究中分離的KDV是首次從我國(guó)分離到，GETV和DNV都是首次從云南省分離到，說(shuō)明在海拔較高的滇西北地區(qū)

13、仍然存在蟲(chóng)媒病毒的循環(huán)，提示應(yīng)加強(qiáng)當(dāng)?shù)叵x(chóng)媒病毒監(jiān)測(cè)，預(yù)防人畜傳染病的流行。7月～9月為當(dāng)?shù)匚妹矫芏容^高的季節(jié)，能分離到多種蟲(chóng)媒病毒，提示當(dāng)?shù)匚妹交顒?dòng)頻繁，蟲(chóng)媒病毒種類豐富，特別是分離到十余株JEV，提示當(dāng)?shù)貫橐夷X疫源地。分離到Seadono病毒屬3個(gè)成員中的兩種病毒(BAV、KDV)，說(shuō)明該區(qū)域是雙鏈RNA病毒十分活躍的地區(qū)，此前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有在同一地區(qū)同一時(shí)間內(nèi)分離到本屬的兩種病毒。該類病毒的大量存在與當(dāng)?shù)厝诵蠹膊〉年P(guān)系尚待考證。在滇西北