小鼠znf230和人TCP11基因的克隆和功能研究.pdf

1、小鼠作為一種模式生物被廣泛地運(yùn)用在精子發(fā)生相關(guān)基因的功能研究中.該文運(yùn)用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)和電子克隆的方法,克隆了人類精子發(fā)生相關(guān)基因ZNF230的小鼠同源基因znf230(GenBank接受號(hào)AF353167).后者cDNA全長982bp,編碼230個(gè)氨基酸,分子量26kD的肽鏈.生物信息學(xué)分析的結(jié)果顯示:1)小鼠znf230蛋白同樣包括一個(gè)C3HC4型鋅指蛋白結(jié)構(gòu)域;2)與人ZNF230基因相比,兩者的核酸和氨基酸序列高度同源

2、,分別為92﹪和98﹪;3)兩者鋅指域的同源性高達(dá)100﹪,與其它物種來源的C3HC4型鋅指蛋白相比,該結(jié)構(gòu)域在進(jìn)化上高度保守,提示其功能也可能保守;4)用PSORT軟件分析的結(jié)果提示,該基因定位于細(xì)胞核中;5)小鼠znf230基因的基因組序列全長28kb,將其cDNA分為6個(gè)外顯子,其內(nèi)含子和外顯子的剪切位點(diǎn)符合GT-AG規(guī)則;6)根據(jù)小鼠znf230基因組序列的定位信息和人-小鼠同源圖譜分析,將小鼠基因定位于7號(hào)染色體.用North

3、ern雜交對(duì)小鼠znf230基因表達(dá)的時(shí)空特異性進(jìn)行研究.用RT-PCR對(duì)不同發(fā)育階段的小鼠znf230基因的表達(dá)進(jìn)行研究的結(jié)果表明,該基因在產(chǎn)后6天開始表達(dá),產(chǎn)后14-21天達(dá)到最高峰,即達(dá)到成年時(shí)的表達(dá)水平.酵母單雜交的結(jié)果顯示,小鼠znf230蛋白具有轉(zhuǎn)錄激活活性,并可能主要是通過鋅指結(jié)構(gòu)域起作用,而要達(dá)到最大轉(zhuǎn)錄激活活性,則可能同時(shí)需要非鋅指結(jié)構(gòu)域的存在.體外轉(zhuǎn)錄翻譯和Southwestern雜交證實(shí),26kD的小鼠znf230