羅格列酮對(duì)非酒精性脂肪性肝炎大鼠TNF-α表達(dá)作用的研究.pdf

1、目的： 非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)是一種遺傳．環(huán)境．代謝相關(guān)性疾病，是以肝細(xì)胞彌漫性脂肪變性和炎癥為特征的臨床病理綜合征。目前NASH的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，且無(wú)有效的治療方法?，F(xiàn)在所公認(rèn)的發(fā)病機(jī)制是胰島素抵抗第一次打擊和氧化應(yīng)激、脂質(zhì)過氧化、炎性細(xì)胞因子釋放的“二次打擊”學(xué)說。初次打擊使脂肪肝發(fā)生，二次打擊導(dǎo)致脂肪肝發(fā)生炎癥、壞死和纖維化。胰島素增敏劑噻唑烷二酮類(

2、Thiazolidinediones，TZDs)如羅格列酮(Rosiglitazone)可使過氧化酶體增殖激活受體γ(peroxisome proliferators activated receptors，PPAR-γ)活化，活化的PPAR-γ可抑制Kupffer細(xì)胞釋放腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1(Interleukin-1，IL-1)、白介素-6(Interleukin

3、-6，IL-6)等炎性介質(zhì)而具有抗炎作用。本實(shí)驗(yàn)通過高脂飼料喂養(yǎng)建立NASH大鼠模型，并應(yīng)用PPAR-γ激動(dòng)劑羅格列酮給大鼠灌胃，觀察PPAR-γ激動(dòng)劑羅格列酮對(duì)NASH大鼠肝損傷的治療作用及其對(duì)TNF-α表達(dá)的影響，旨在探討該藥物在NASH中可能的治療作用及其作用機(jī)制。 方法： 45只雄性Wistar大鼠分為正常對(duì)照組(10只)和模型組(35只)。以高脂飼料喂養(yǎng)建立NASH大鼠模型，16周末，處死正常對(duì)照組大鼠2只，

4、模型組4只，證實(shí)造模成功后，將模型組進(jìn)一步分為4組：治療對(duì)照組(模型組)(8只)、高劑量治療組(8只)、低劑量治療組(8只)和聯(lián)合治療組(7只)。28周末，股靜脈放血處死所有動(dòng)物，留取血清及肝組織進(jìn)行以下項(xiàng)目檢測(cè)：全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠血清總膽固醇(cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(alanine transaminase，ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate

5、 transaminase，AST)水平；ELISA法測(cè)定血清腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平；肝組織用于快速冰凍切片，行SudanⅣ染色，觀察肝細(xì)胞脂變情況；另以10％甲醛固定，常規(guī)包埋、切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色，觀察肝組織的炎癥、脂肪變性程度；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(reverse transcription-polymerasechain reaction，RT-PCR)檢

6、測(cè)肝組織TNF-α mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1、一般情況：28周末，正常對(duì)照組大鼠，食欲佳，皮毛光滑，精神狀態(tài)好，體重增加。模型組大鼠精神萎靡，活動(dòng)減少，食欲減退，消瘦，皮毛欠光澤，體重較前有所下降。治療組大鼠精神、食欲及活動(dòng)介于正常對(duì)照組與模型組之間。 2、生化指標(biāo)檢測(cè)：NASH模型組TC(2.95±0.32mmol/L)、TG(0.88±0.17mmol/L)、ALT(96.63±14.16U/L)、AS

7、T(156.13±14.74U/L)明顯升高，高劑量治療組、低劑量治療組和聯(lián)合治療組血清TC(2.03±0.21mmol/L，2.49±0.31mmol/L，2.00±0.24mmol/L)、TG(0.54±0.14mmol/L，0.71±0.14mmol/L，0.52±0.14 mmol/L、)、ALT(67.38±13.68U/L，82.38±12.01U/L，45.14±12.05U/L)、AST(94.25±15.70U/L，1

8、29.5±16.70U/L，91.00±16.31U/L)均低于模型組，且高劑量治療組血脂、轉(zhuǎn)氨酶低于低劑量治療組，聯(lián)合治療組血脂、轉(zhuǎn)氨酶下降最明顯。 3、肝臟組織學(xué)改變：肉眼觀察，正常大鼠肝臟呈紅褐色，明亮有光澤。模型組大鼠肝臟體積明顯增大，邊緣圓鈍，呈淺黃色或土黃色，與周圍組織有粘連，可見局灶性黃白色變性灶，切面油膩，無(wú)光澤。光鏡下，正常大鼠肝細(xì)胞索以肝小葉中央靜脈為中心呈放射狀排列。SudanⅣ染色肝細(xì)胞胞漿中無(wú)紅染顆粒

9、。模型組胞漿內(nèi)充滿大量脂肪空泡，出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性、氣球樣變，可見小葉內(nèi)有點(diǎn)狀或灶性壞死，壞死肝細(xì)胞周圍有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。高劑量治療組、低劑量治療組及聯(lián)合治療組肝細(xì)胞亦有輕度細(xì)胞腫脹，小葉結(jié)構(gòu)基本正常，但肝細(xì)胞變性及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度明顯減輕。 4、ELISA法檢測(cè)血清TNF-α水平：模型組血清TNF-α水平(48.231±3.381pg/ml)明顯升高；高劑量治療組、低劑量治療組及聯(lián)合治療組血清TNF-α水平分別是(38.660±

10、3.543pg/ml)、(43.211±3.775pg/ml)、(32.024±3.804 pg/ml)，明顯低于模型組(P均<0.01)；高劑量治療組血清TNF-α水平低于低劑量治療組(P<0.05)；聯(lián)合治療組血清TNF-α水平下降最明顯(P<0.01)。 5、RT-PCR.法檢測(cè)肝組織TNF-αmRNA的表達(dá)：正常對(duì)照組肝組織TNF-αmRNA表達(dá)量(0.224±0.057)很少；模型組肝組織TNF-α mRNA表達(dá)(0

11、.954±0.063)顯著增強(qiáng)；高劑量治療組、低劑量治療組及聯(lián)合治療組肝組織TNF-αmRNA表達(dá)分別是(0.714±0.059)、(0.851±0.056)、(0.424±0.057)，均明顯低于模型組(P均<0.01)，且高劑量治療組表達(dá)低于低劑量治療組(P<0.01)，聯(lián)合治療組肝組織TNF-αmRNA表達(dá)明顯低于低劑量治療組(P<0.01)。 結(jié)論： 1、采用高脂飼料喂養(yǎng)的方法成功復(fù)制了NASH大鼠模型。