GSK-3β穩(wěn)定錯(cuò)配修復(fù)蛋白PMS2抑制卵巢癌的探索.pdf

1、第一部分 PMS2，GSK-3β和 p-GSK-3β在卵巢癌細(xì)胞株中的表達(dá)及意義
　　 目的:檢測PMS2，GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌細(xì)胞株A2780，Angle，NIH：OVCAR-3，Caov3，SKOV3中的表達(dá)與相互關(guān)系及意義。
　　 方法:
　　 1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測PMS2和GSK-3βmRNA水平在A2780，Angle，NIH：
　　 OVCAR-3，Caov3，SK

2、OV3細(xì)胞及正常卵巢組織中的表達(dá)。
　　 2.Western blot免疫印跡法檢測PMS2，GSK-3β和p-GSK-3β的蛋白水平在A2780，Angle，NIH：OVCAR-3，Caov3，SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 3.免疫組化雙染法檢測卵巢組織中PMS2和p-GSK-3β的表達(dá)。
　　 4.分析PMS2與GSK-3βmRNA 水平的相關(guān)性和PMS2與GSK-3β磷酸化水平（p-GSK-3β/GSK-

3、3β）的相關(guān)性。
　　 5.MTT法檢測LiCl阻斷GSK-3β活性后，細(xì)胞增殖的改變。
　　 結(jié)果:
　　 1.PMS2 mRNA在A2780，Angle，NIH：OVCAR-3，Caov3，SKOV3細(xì)胞的表達(dá)相對(duì)量分別為正常卵巢組織的74.59±41.376，1.85±0.369，50.16±30.316，1.65±0.901，3.04±0.887倍；GSK-3βmRNA在A2780，Angle，NIH：O

4、VCAR-3，Caov3，SKOV3細(xì)胞的表達(dá)相對(duì)量分別為正常卵巢組織的54.27±32.137，0.47±0.010，92.04±30.316，17.44±2.621，5.08±0.256倍。
　　 2.PMS2，GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌細(xì)胞株A2780，Angle，NIH：OVCAR-3，Caov3，SKOV3中均有表達(dá)。
　　 3.PMS2和GSK-3βmRNA在人卵巢癌細(xì)胞株和正常卵巢組織中的表達(dá)

5、呈正相關(guān)性；PMS2與p-GSK-3β呈負(fù)相關(guān)。
　　 4.不同濃度的LiCl作用于卵巢癌細(xì)胞株后，細(xì)胞增殖被抑制，且抑制率呈LiCl的濃度依賴性。
　　 結(jié)論:PMS2，GSK-3β和p-GSK-3β在人卵巢癌細(xì)胞株A2780，Angle，NIH：OVCAR-3，Caov3，SKOV3中均有表達(dá)，PMS2的表達(dá)可能受GSK-3β的調(diào)控。
　　 第二部分 GSK-3β在卵巢癌細(xì)胞株中穩(wěn)定PMS2表達(dá)的研究

6、　　 目的：檢測GSK-3β能否穩(wěn)定PMS2的表達(dá)。
　　 方法：
　　 1.Western blot免疫印跡法檢測不同濃度LiCl作用于卵巢癌細(xì)胞株A2780，Angle，NIH：OVCAR-3，Caov3，SKOV3后，PMS2，GSK-3β和p-GSK-3β蛋白水平的改變。
　　 2.LiCl處理細(xì)胞后，用放線菌酮抑制蛋白合成，檢測PMS2蛋白的半衰期改變。
　　 3.免疫共沉淀的方法檢測PMS2

7、和GSK-3β在自然狀態(tài)下是否結(jié)合。
　　 結(jié)果：
　　 1.LiCl 抑制GSK-3β活性后，卵巢癌細(xì)胞株A2780，Angle，NIH：OVCAR-3，Caov3，SKOV3中PMS2的表達(dá)明顯下降，并呈LiCl 劑量依賴性。
　　 2.LiCl 抑制GSK-3β活性后，PMS2的半衰期約為2h，而對(duì)照組PMS2在2.5h 內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。
　　 3.用GSK-3β抗體沉淀下來的免疫復(fù)合物中可以檢測到PM

8、S2的存在；相應(yīng)用PMS2抗體沉淀下來的免疫復(fù)合物中也可檢測到GSK-3β的存在。
　　 結(jié)論：GSK-3β可與PMS2 相結(jié)合并穩(wěn)定PMS2的表達(dá)。
　　 第三部分 PMS2 可能參與LPS 誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞的增殖與遷移
　　 目的：探討LPS在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖與遷移中的作用及作用機(jī)制，并明確PMS2在其中的作用。
　　 方法：
　　 1.MTT法檢測不同濃度LPS作用于卵巢癌細(xì)胞株A2780，A

9、ngle，NIH：OVCAR-3，Caov3，SKOV3，對(duì)細(xì)胞增殖的影響。
　　 2.Transwell小室法檢測LPS對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移的影響。
　　 3.Western blot法檢測LPS刺激后，TLR4，MyD88，PMS2，GSK-3β等基因蛋白水平的改變。
　　 結(jié)果：
　　 1.LPS 刺激可以誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞A2780，Angle，NIH：OVCAR-3，Caov3，SKOV3的增殖，并且這