銀屑病與兒童孤獨癥的易感基因的突變研究.pdf

1、一、銀屑病患者的FLG基因突變篩查
　　銀屑病(Psoriasis，PS，OMIM177900)是一種常見的慢性炎癥性皮膚病，臨床特征為皮膚上出現(xiàn)紅斑，并覆有銀白色鱗屑，可累及皮膚任何部位，好發(fā)于頭皮、軀干及四肢伸側(cè)。病理特征為角質(zhì)增厚或角化不全、顆粒層變薄或消失、棘層增厚;細(xì)胞間隙增寬，炎癥細(xì)胞向表皮和真皮浸潤。銀屑病在世界范圍內(nèi)發(fā)病率約為0.6～4.8％;據(jù)估計我國銀屑病患者已接近1，000萬。銀屑病多發(fā)病于15歲至30歲之間

2、，常伴隨患者一生。銀屑病被認(rèn)為是一種多基因遺傳病，其發(fā)病機制復(fù)雜、至今尚未完全闡明。各種遺傳或環(huán)境因素主要通過影響免疫系統(tǒng)、炎癥反應(yīng)通路或表皮功能而致病，吸煙、飲酒、精神緊張和物理損傷等其他原因也是常見促發(fā)因素。
　　FLG(filaggrin)基因，位于1q21.3，編碼絲聚蛋白(filaggrin，F(xiàn)ilament Aggregating Protein)的無活性不溶性前體絲聚蛋白原(profilaggrin)。絲聚蛋白是透明

3、角質(zhì)顆粒(Keratohyalin Granules，KHG)中的主要成份。絲聚蛋白的終產(chǎn)物在皮膚表面形成保濕因子。FLG基因的突變可導(dǎo)致表皮角化異常，從而引發(fā)相關(guān)皮膚病。FLG基因最早被證明是尋常性魚鱗病的致病基因，最近又有報導(dǎo)FLG基因的突變也會導(dǎo)致特異性皮炎的發(fā)生。免疫組化的結(jié)果顯示銀屑病患者的表皮顆粒層中絲聚蛋白明顯減少，提示FLG基因可能參與了銀屑病的發(fā)生。
　　在本研究中，我們收集了2個中國漢族銀屑病/魚鱗病家系，32

4、8例中國漢族散發(fā)銀屑病患者和500例正常對照，采用長片斷PCR擴增和直接測序的方法分析患者與正常人的FLG基因序列，尋找與銀屑病相關(guān)的突變。
　　我們在家系1中檢測到FLG基因的無義突變K4022X，其中先證者攜帶有純合突變K4022X，魚鱗病患者(Ⅰ:4，Ⅱ:6)攜帶有雜合突變K4022X，另有4個表型正常個體(Ⅰ:2，Ⅱ:1，Ⅱ:4，Ⅱ:5)攜帶有雜合突變K4022X。在328例散發(fā)病人中檢測到2個純合突變K4022X，22個

5、雜合突變K4022X。在500例正常對照中檢測到15個雜合突變K4022X。等位基因頻率(x2=12.56，P＜0.005);基因型頻率(x2=16.76，P＜0.005)。Logistic回歸中，OR=2.855，95％ CIs=2.275-9.974。家系2中我們沒有檢測到FLG基因的任何突變。
　　上述研究提示，F(xiàn)LG基因的無義突變K4022X導(dǎo)致銀屑病家系1銀屑病的發(fā)生。銀屑病家系2可能存在其它未知基因的突變。FLG基因的

6、K4022X突變在中國漢族人群中的等位基因頻率為1.5％，可能是一種皮膚角化異常有關(guān)的常見突變。
　　二、孤獨癥患者的NLGN3/4/Y基因的突變篩查
　　孤獨癥(Autism，OMIM209850)，又稱為自閉癥，是一種嚴(yán)重的兒童精神發(fā)育障礙疾病。通常起病于3歲之前，目前國外報道兒童孤獨癥的患病率為6‰，國內(nèi)報道學(xué)齡前兒童患病率為1‰，美國約為4-10萬，歐洲約10萬，中國約2.8-10萬[1]男女患病率之比為4∶1。主要

7、臨床表現(xiàn)為不同程度的社會交往能力缺陷、語言交流技巧障礙、重復(fù)刻板的動作和興趣狹窄等。
　　孤獨癥的發(fā)病機制至今尚未闡明，已有研究表明，孤獨癥屬于復(fù)雜性疾病，且遺傳度較高。細(xì)胞遺傳學(xué)研究、同胞、家系研究以及病例對照關(guān)聯(lián)分析、全基因組關(guān)聯(lián)分析等研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多與孤獨癥相關(guān)的位點，克隆了多個易感基因。
　　研究表明，神經(jīng)突觸異?？赡軙?dǎo)致孤獨癥的發(fā)生。NLGN家族屬于突觸后細(xì)胞粘附分子，通過與突觸前細(xì)胞粘附因子α-neurexi

8、n或β-neurexin形成異四聚體，調(diào)控神經(jīng)元的突觸興奮或突觸抑制。 NLGN家族共包括5個成員:NLGN1(3q26.31)，NLGN2(17p13.1)，NLGN3(Xq13.1),NLGN4(Xp22.3)和NLGNY(Yq11.221)。已有研究發(fā)現(xiàn)，NLGN3/4/Y的突變可導(dǎo)致孤獨癥的發(fā)生，但在中國人群中還沒有NLGN家族基因與孤獨癥的相關(guān)研究。
　　在本研究中，我們收集了中國漢族人群318例散發(fā)孤獨癥患者及278例

9、正常對照，采用PCR擴增和直接測序的方法分析患者的NLGN3/4/Y基因序列，確定中國孤獨癥患者的NLGN3/4/Y基因突變。
　　318例散發(fā)孤獨癥患者中我們檢測到NLGN3基因的1個同義突變c.1638G＞A和1個錯義突變G406S以及NLGN4基因的1個同義突變c.1194C＞T和3個錯義突變G84R、Q162K、A283T。在278例正常對照中沒有發(fā)現(xiàn)這6個突變。
　　NLGN3/4的同義突變c.1638G＞A(NL